眼鏡蛇神經(jīng)毒素對人肺腺癌A549細胞生長抑制作用研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 眼鏡蛇神經(jīng)毒素對人肺腺癌A549細胞生長抑制作用研究。
　　目的：觀察眼睛蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)體外抗腫瘤作用,并探討其相關(guān)機制。
　　方法：以人肺腺癌A549細胞(野生型P53,wild-typeP53,wtP53)為實驗對象。通過四氮唑鹽還原法(MTT)檢測眼鏡蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)對人肺腺癌A549細胞和HFL1人肺成纖維細胞的生長抑制率;應用細胞

2、集落平板克隆實驗檢測cobrotoxin對A549細胞的集落形成的影響;應用透射電鏡觀察cobrotoxin作用后自噬的發(fā)生;蛋白免疫印跡法(Western blot)測定單獨cobrotoxin作用、cobrotoxin分別聯(lián)合3-MA(3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤,自噬抑制劑)抑制自噬和SB203580(吡啶咪唑化合物, P38信號轉(zhuǎn)導通路特異性抑制劑)抑制P38-MAPK通路活性后A549細胞內(nèi)Beclin-1、

3、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表達水平。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示不同濃度cobrotoxin對A549細胞的生長均有明顯抑制作用,對HFL1人肺成纖維細胞無顯著抑制作用;不同濃度cobrotoxin可明顯抑制A549細胞的集落形成;cobrotoxin作用后透射電鏡可觀察到cobrotoxin組較對照組自噬小體明顯增多,3-MA、SB203580分別干預后自噬小體有所減少;cobrotoxin作用后Beclin-1、pP

4、38、Ⅱ型LC3蛋白表達水平明顯提高,P62表達明顯降低,并有濃度依賴性,3-MA抑制自噬后Beclin-1、Ⅱ型LC3蛋白表達水平降低,P62表達增高, SB203580抑制P38-MAPK通路后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表達水平降低, P62表達增高
　　結(jié)論：cobrotoxin對人肺癌A549細胞體外生長有抑制作用,其作用與誘導自噬有關(guān),其中誘導自噬作用可能和活化P38-MAPK通路有關(guān)。
　　第二部

5、分 眼鏡蛇神經(jīng)毒素對人肺腺癌A549細胞裸鼠移植瘤生長抑制作用。
　　目的：觀察眼睛蛇神經(jīng)毒素(cobrotoxin)對人肺腺癌A549細胞(wtP53)裸鼠移植瘤生長抑制作用,及探討自噬對cobrotoxin的腫瘤抑制作用的影響。
　　方法：接種人肺腺癌A549細胞建立裸鼠移植瘤模型,分40ug/kg cobrotoxin組、40ug/kg cobrotoxin+10mmol/kg3MA組、40ug/kg cobrotox

6、in+5mg/kg SB203580組和陰性對照組4組,按以上規(guī)定劑量在移植瘤周圍皮下注射cobrotoxin,隔日注射一次,共注射10次,同時陰性對照組動物移植瘤周皮下注射等量生理鹽水。給藥4周后,比較移植瘤瘤重,計算抑瘤率。
　　結(jié)果：cobrotoxin對人肺癌A549細胞裸鼠移植瘤生長有抑制作用,抑瘤率為35.7％(cobrotoxin40μg/kg組),3-MA(10mmol/kg)、SB203580(5mg/kg)干預