中華眼鏡蛇細(xì)胞毒素基因克隆、表達(dá)及對(duì)腫瘤細(xì)胞作用機(jī)理的研究.pdf

1、中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文中華眼鏡蛇細(xì)胞毒素基因克隆、表達(dá)及對(duì)腫瘤細(xì)胞作用機(jī)理的研究姓名：陳興勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：徐康森劉兢20090501摘要胞色素C途徑相關(guān)。通過(guò)分析K562血液病的形成機(jī)制，認(rèn)為CTXIII可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ATP，從而阻斷K562細(xì)胞中異常酪氨酸激酶活性。3、本論文同時(shí)分析了CTXⅡI作用于實(shí)體瘤肝癌的應(yīng)用效果，在較低劑量下，CTXⅡI可有效抑制HepG2細(xì)胞增殖(24小時(shí)

2、的IC50=258pg／m1)，但對(duì)Bel1402無(wú)明顯作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，DAPI染色、mmexinV／PI雙染實(shí)驗(yàn)和DNA片段分析證明CTXIII促使細(xì)胞發(fā)生凋亡，其凋亡過(guò)程受死亡受體途徑和線(xiàn)粒體途徑兩種機(jī)制調(diào)控。CTXIII的作用早期HepG2細(xì)胞周期停滯于S期，半定量PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，周期素蛋白CyclinDl、CyclinA和CyclinE在轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程中，其蛋白和mRNA水平均有所下調(diào)，Bcl2／BaX的蛋白和m

3、RNA比例亦均發(fā)生變化。尾靜脈注射CTXIII引起小鼠快速死亡，LD50為9367士38斗g瓜g。建立體內(nèi)裸鼠HepG2腫瘤模型，經(jīng)口服給藥結(jié)果表明，CTXIII(2mg／l(∥d)可明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)，其抑瘤率可達(dá)394％。病理檢查心、肝、脾、肺、腎及小腸等臟器，未發(fā)現(xiàn)出血或壞死，表明CTXIII經(jīng)口服對(duì)動(dòng)物體基本無(wú)毒副作用。綜上所述，CTXIII體內(nèi)、外作用均可有效的抑制腫瘤細(xì)胞(K562、H印G2)的增殖，真核酵母表達(dá)產(chǎn)生的重組細(xì)胞