廣西眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素的分離純化及其鎮(zhèn)痛作用的研究.pdf

1、目的：從廣西眼鏡蛇粗毒中分離純化神經(jīng)毒素，對(duì)其理化性質(zhì)、鎮(zhèn)痛作用及神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。 方法：用CMSephadexC-25離子交換、SephadexG-50凝膠過(guò)濾層析法分離純化廣西眼睛鏡蛇的神經(jīng)毒素(neurotoxin,NT)。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)對(duì)分離純化廣西眼睛鏡蛇的神經(jīng)毒素純度進(jìn)行鑒定；以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定其分子量。用硫酸銨鹽析，離子交換柱層析分離純化SD大鼠的轉(zhuǎn)鐵

2、蛋白。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)分離純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白純度進(jìn)行鑒定。分別應(yīng)用2.亞氨氫氯化硫醇(2-iminothiolane)、異型雙功能連接劑間馬來(lái)酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺(m-Maleimidoben-zoyl-N-hydoxysuccinimide ester,MBS)將大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白、神經(jīng)毒素偶聯(lián)，合成神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)體。用Sephacryl S-200凝膠過(guò)濾層析法鑒定偶聯(lián)體的純度，用單向免疫免疫擴(kuò)散法測(cè)定神偶聯(lián)體中

3、的神經(jīng)毒素的量。用小鼠熱板法與醋酸扭體法，觀察神經(jīng)毒素、神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)體的鎮(zhèn)痛作用。 結(jié)果：從廣西眼鏡蛇毒中分離出的NT為單一組分，分子量約為7862Da。在小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)中，神經(jīng)毒素能使小鼠痛閾提高百分率53.4％，神經(jīng)毒素．轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物能使痛閾提高百分率95.1％。小鼠扭體抑制率為57.6％．阿托品能拮抗神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物的鎮(zhèn)痛作用(p<0.01)：甲基阿托品未能拮抗神經(jīng)毒素一轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物的鎮(zhèn)痛作用(p>0