全反式維甲酸聯(lián)合索拉菲尼對人SMMC-7721肝癌細胞株的作用.pdf

1、誘導分化劑及分子靶向治療類藥物有復雜的細胞內(nèi)作用機制途徑，聯(lián)合應用于肝癌的治療目前尚未見實驗報道?，F(xiàn)擬觀察不同濃度索拉菲尼與 ATRA在
　　背景及目的：
　　原發(fā)性肝癌是一種病死率很高嚴重危害健康的惡性消化系統(tǒng)腫瘤，其中約90％為肝細胞癌（hepatocellular carcinoma簡稱HCC，肝癌)[1].我國每年肝癌新增約十萬病例。肝癌在早期隱匿生長讓人不易發(fā)現(xiàn)其存在，但早期腫瘤利用如手術(shù)、介入局部TACE及射頻等

2、方法是能夠進行治療的[2]。目前的大多數(shù)發(fā)病者已經(jīng)成為肝癌中晚期進展患者，無法選擇及接受上述介入及手術(shù)的治療。選擇藥物方案治療是上述中晚期進展肝癌患者姑息治療的重要方法，但傳統(tǒng)化療藥物效果不理想，因此積極探索更有效的肝癌治療的藥物聯(lián)合方案是一個新的途徑。
　　全反式維甲酸（ATRA)是能誘導細胞分化的一種維生素 A代謝產(chǎn)物，被公認為是具有誘導癌變及正常細胞生長分化作用[3]。全反式維甲酸作用于細胞周期及細胞DNA合成，使細胞周期阻

3、滯形成及通過細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑恢復細胞的正常功能，并通過細胞內(nèi)信號途徑抑制血管生成因子的活性而抑制惡性腫瘤血管生成[4]。索拉非尼(sorafenib)由德國拜耳制藥研發(fā)。是一種多激酶抑制劑，是美國FDA批準的第一個在肝癌系統(tǒng)性治療使用的一線分子靶向治療口服制劑，有同時抑制腫瘤細胞增殖和腫瘤新生血管形成的作用[5]。近年很多報道聯(lián)合Sorafenib與傳統(tǒng)化療藥物作用于腫瘤相關(guān)試驗。
　　誘導分化劑及分子靶向治療類藥物有復雜的細胞

4、內(nèi)作用機制途徑，聯(lián)合應用于肝癌的治療目前尚未見實驗報道?，F(xiàn)擬觀察不同濃度索拉菲尼與 ATRA在體外細胞試驗中聯(lián)合應用于人肝癌SMMC-7721細胞的協(xié)同抑制作用。對肝癌中晚期治療潛在的方案提供實驗依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1．以SMMC-7721肝癌細胞為靶作用細胞，觀察ATRA及不同濃度Sorafenib單獨及聯(lián)合干預細胞后在倒置顯微鏡呈現(xiàn)的不同細胞形態(tài);
　　2．MTT法測ATRA、不同濃度Sorafenib及

5、二者聯(lián)用于24h、48h、72h的SMMC-7721細胞增殖抑制率;
　　3．流式細胞儀檢測ATRA聯(lián)合9μmol/L Sorafenib干預SMMC-7721細胞48h后的細胞周期以及凋亡率;
　　結(jié)果：
　　對照組腫瘤細胞即正常細胞在倒置顯微鏡下呈充盈不規(guī)則條梭狀，加ATRA及加9μmol/L濃度Sorafenib48小時后胞體間隙變大、肝癌細胞部分裂解及漂浮在培養(yǎng)液中，顯示凋亡狀態(tài)；聯(lián)合組48小時細胞減少同時細胞

6、凋亡改變明顯，大部分細胞已裂解成碎片，加藥組至72小時后凋亡增加但較前不顯著。
　　MTT法檢查結(jié)果見：ATRA對SMMC-7721細胞增殖有抑制效果,持續(xù)48 h后細胞生長抑制最顯著；濃度不同的Sorafenib單藥亦可抑制癌細胞生長,符合劑量-時間依賴性；而聯(lián)合組較單藥作用相比其細胞抑制持續(xù)明顯增強（P<0.01）；12μmol/L索拉菲尼、9μmol/L索拉菲尼分別與ATRA聯(lián)合持續(xù)作用于細胞48h及72h相比較，其OD值間

7、統(tǒng)計差異不明顯（P<0.05）
　　流式細胞結(jié)果示,加入ATRA的細胞顯示G0/G1期阻滯，而Sorafenib作用肝癌細胞表現(xiàn)為S期的細胞阻滯。當兩藥聯(lián)用后出現(xiàn)S期阻滯且較單藥增強， SMMC-7721細胞凋亡率較前明顯增加(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　維甲酸和索拉非尼都能夠抑制肝癌細胞的生長及誘導凋亡，聯(lián)合使用抗腫瘤效果更明顯，具有協(xié)同作用，可減少索拉菲尼劑量避免耐藥產(chǎn)生，或許是肝癌治療更有效的方案。而誘導分