草蓯蓉乙醇提取物對人肝癌SMMC-7721細胞株增殖及凋亡的干預作用.pdf

1、目的：探討草蓯蓉乙醇提取物對人肝癌SMMC-7721細胞株生長抑制及誘導凋亡的影響，為其成為防治腫瘤的中草藥物提供實驗依據(jù)。 方法：選用人肝癌SMMC-7721細胞株進行體外培養(yǎng)，用MTT比色法測定不同濃度、不同時間段草蓯蓉乙醇提取物對該細胞的抗增殖作用；應用倒置顯微鏡、HE染色光學顯微鏡、吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染色熒光顯微鏡及透射電鏡技術觀察藥物作用后的細胞形態(tài)學改變；應用流式細胞術檢測細胞周期及細胞凋亡率的變化。

2、 結果：1)MTT實驗表明：草蓯蓉乙醇提取物在0．25～1.0g/L范圍內，于6h、12h、24h對人肝癌SMMC-7721細胞株均有抑制生長作用，并表現(xiàn)出濃度、時間依賴性關系。草蓯蓉乙醇提取物在終濃度為1.0g/L時，于24h體外最大抑制率達到97.88％，與對照組比較具有顯著性差異。2)倒置顯微鏡下，實驗組SMMC-7721細胞生長緩慢，呈單層生長：細胞形態(tài)變圓，胞漿內可見空泡樣改變；隨著藥物作用時間的延長腫瘤細胞貼壁能力逐漸

3、減弱。HE染色光鏡下，實驗組SMMC-7721細胞體積變小，呈梭形：隨著藥物作用時間的延長細胞生長抑制作用更明顯；部分細胞收縮變圓，胞漿嗜酸性增強，細胞核固縮成團塊兒狀，呈現(xiàn)出典型凋亡形態(tài)學改變。AO/EB雙染色熒光顯微鏡下，實驗組SMMC-7721細胞核體積縮小，細胞核內可見到致密濃染的塊狀或顆粒樣的改變，發(fā)出橘黃色熒光；部分細胞表面有“出泡”現(xiàn)象。透射電子顯微鏡觀察0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理后的肝癌細胞表面微絨毛部分脫落或全部

4、消失，部分細胞表面有指狀突起：細胞核呈不規(guī)則形，部分細胞核出現(xiàn)固縮，部分細胞核內染色質凝聚，呈塊狀分布；細胞質內出現(xiàn)空泡狀結構，細胞器尚完整。3)流式細胞儀檢測，對照組細胞凋亡率僅為0.04％：當0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理12h、18h、24h后細胞凋亡率分別上升為9.64％、11.65％，0、32.91％，與對照組相比有統(tǒng)計學差異，并隨藥物作用時間的延長呈增高趨勢。細胞周期分析發(fā)現(xiàn)對照組G<,0>/G<,1>期、S期百分比分別為

5、49.24％、18.33％：0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理12h、18h、24h后G<,0>/G<,1>期百分比均升高，S期百分比均下降，藥物組與正常對照組相比均有統(tǒng)計學差異，G<,2>/M期百分比無明顯改變，表明藥物作用后SMMC-7721細胞被阻滯于G<,0>/G<,1>期。 結論： 1)體外實驗中，草蓯蓉乙醇提取物對人肝癌SMMC-7721細胞生長有抑制作用，呈現(xiàn)出量效和時效關系。 2)經(jīng)凋亡形態(tài)學、流式