普萘洛爾對人肺腺癌細胞株A549細胞MMP-9表達影響的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　通過對普萘洛爾作用于人肺腺癌A549細胞后其基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達變化的研究，并分析這種變化與普萘洛爾濃度的關(guān)系，來探討MMP-9成為肺癌治療中的一個新靶點的可行性，為肺癌的靶向治療提供一種新的思路。
　　研究方法：
　　(1)體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細胞。
　　(2)挑選生長狀態(tài)良好且呈對數(shù)期生長的細胞，按照隨機對照原則分成實驗組（給藥組）及對照組（空白組），對照組均給予含0ug/

2、ml的普萘洛爾細胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，實驗組分別給予5個不同濃度的普萘洛爾細胞培養(yǎng)液處理，具體的濃度為:實驗組1:2ug/ml，實驗組2:4ug/ml，實驗組3:8ug/ml，實驗組4:16ug/ml，實驗組5:20ug/ml，每個相同濃度的組內(nèi)又分為三個小組，分別為培養(yǎng)后12h、24h及48h的小組，并為每個時間段的小組設(shè)置六個平行孔。
　　(3)培養(yǎng)完成后進行測定:將細胞培養(yǎng)液離心，取上清液，應(yīng)用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（即

3、ELISA法），測量各組細胞對應(yīng)的人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的水平。
　　實驗結(jié)果：
　　(1)顯微鏡下觀察
　　各組細胞在經(jīng)過含有不同濃度的普萘洛爾細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)后:同一濃度下培養(yǎng)后12h及24h后生長狀態(tài)及細胞密度無明顯變化，但在培養(yǎng)48h后顯微鏡下觀察培養(yǎng)液中有大量漂浮的死亡細胞;不同濃度培養(yǎng)時同一時間段細胞的生長狀態(tài)及細胞密度無明顯區(qū)別。
　　(2)生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定的

4、結(jié)果
　　與對照組相比，5個實驗組的細胞經(jīng)過普萘洛爾細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)后，人肺腺癌細胞株A549細胞MMP-9的表達水平下降，且培養(yǎng)后12h＞培養(yǎng)后24h＞培養(yǎng)后48h。并且經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)軟件分析結(jié)果:P＜0.05，說明普萘洛爾濃度與培養(yǎng)時間段這兩個因素對所培養(yǎng)細胞MMP-9表達的影響有統(tǒng)計學(xué)意義;
　　實驗組4(16ug/ml)與實驗組5(20ug/ml)MMP-9的檢測濃度降低尤為明顯，且降低幅度實驗組5＞實驗組4，而實驗組1、

5、2、3降低幅度小，組間比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明普萘洛爾濃度達到16ug/ml時對所培養(yǎng)細胞MMP-9的表達影響顯著，可以作為一個界定濃度，對科研工作有一定的指導(dǎo)意義。
　　結(jié)論：
　　(1)人肺腺癌細胞株A549細胞普遍表達MMP-9，MMP-9通過對細胞外基質(zhì)中Ⅳ型膠原的特異性降解，影響肺腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，使肺癌發(fā)生肺內(nèi)轉(zhuǎn)移及其他部位轉(zhuǎn)移的可能性增加。
　　(2)普萘洛爾影響體外培養(yǎng)人肺腺癌A