姜黃素聯(lián)合紫杉醇對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞株生物學(xué)效應(yīng)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)體外研究姜黃素（curcumin）聯(lián)合紫杉醇（paclitaxel，PTX）對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的作用，探討兩藥聯(lián)合對(duì)A549細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　方法：
　?。?）人肺腺癌 A549細(xì)胞的培養(yǎng)：以含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，置于飽和濕度、CO2濃度為5%、溫度為37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　?。?）分組及處理：設(shè)置對(duì)照組（不加入任何藥物）、DMSO組、姜黃素組、紫

2、杉醇組、姜黃素聯(lián)合紫杉醇組，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期處理后，DMSO組給予與姜黃素組同濃度的DMSO溶液，姜黃素組給予姜黃素濃度為20μmol/L，紫杉醇組給予紫杉醇濃度為4nmol/L，聯(lián)合組姜黃素濃度為20μmol/L，紫杉醇濃度為4nmol/L分別處理。
　　（3）MTT法分別計(jì)算紫杉醇及姜黃素的IC50：取對(duì)數(shù)期A549細(xì)胞接種于96孔板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)后分別加入濃度為0.5nmol/L、1nmol/L、2nmol/L、4nm

3、ol/L、8nmol/L的紫杉醇，濃度為5umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L、80umol/L的姜黃素后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，檢測(cè)各濃度的IOD值，并計(jì)算紫杉醇及姜黃素IC50（半數(shù)抑制濃度）。
　?。?）MTT實(shí)驗(yàn)：取對(duì)數(shù)期A549細(xì)胞接種于96孔板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)后按分組條件處理后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，檢測(cè)各組IOD值，計(jì)算增殖抑制率及兩藥聯(lián)合的Q值。
　?。?）細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè)：將A549細(xì)

4、胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，按分組條件處理后繼續(xù)培養(yǎng)48h，采用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)各組細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡率。
　?。?）將A549細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞單層鋪滿板底時(shí)進(jìn)行劃痕后，按分組條件處理，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)觀察細(xì)胞遷移情況，并計(jì)算各組細(xì)胞遷移距離。
　?。?）制好Matrigel膜后，取對(duì)數(shù)期A549細(xì)胞制成無(wú)血清細(xì)胞懸液加入Transwell小室上室，按分組條件加入對(duì)應(yīng)藥物處理后48小時(shí)，取出小室進(jìn)行染色并計(jì)算穿膜細(xì)胞數(shù)。<

5、br>　?。?）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)各組處理后48小時(shí)HIF-1α及VEGF表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?。?）紫杉醇作用于A549細(xì)胞48小時(shí)的IC50為4nmol/L，姜黃素作用于A549細(xì)胞48小時(shí)的IC50為20umol/L。
　　（2）姜黃素聯(lián)合紫杉醇組對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，其抑制率明顯高于對(duì)照組、紫杉醇組及姜黃素組；姜黃素聯(lián)合紫杉醇對(duì)肺癌A549細(xì)胞的抑制作用具有協(xié)同作用，其Q值為1

6、.072338。
　?。?）DMSO組細(xì)胞周期分布與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P>0.05），姜黃素組細(xì)胞阻滯于S期及G2/M期，紫杉醇組細(xì)胞阻滯于G2/M期，聯(lián)合用藥組細(xì)胞阻滯于G0/G1期及S期。
　　（4）DMSO組凋亡率與對(duì)照組凋亡率無(wú)明顯差異（P>0.05），與對(duì)照組比較各實(shí)驗(yàn)組凋亡率均高于對(duì)照組，聯(lián)合用藥組凋亡率高于其他各組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）與對(duì)照組比較，姜黃素組、紫杉醇組及聯(lián)合用藥

7、組的遷徙距離及穿膜細(xì)胞數(shù)明顯小于對(duì)照組，姜黃素組及紫杉醇組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；聯(lián)合用藥組的遷徙距離及穿膜細(xì)胞數(shù)明顯小于姜黃素組及紫杉醇組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）DMSO組HIF-1α和VEGF的表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；姜黃素組、紫杉醇組及聯(lián)合用藥組HIF-1α及VEGF的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，且各實(shí)驗(yàn)組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HIF-1α及