YC-1增強(qiáng)乏氧人肺腺癌A549細(xì)胞放射敏感性的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討3-（5'-羥甲基-2'-呋喃基）-1-苯甲基吲唑(YC-1)增強(qiáng)乏氧人肺腺癌A549細(xì)胞放射敏感性的作用機(jī)制與HIF-1a及其下游靶基因VEGF之間的相關(guān)性。
　　方法：①M(fèi)TT法檢測(cè)CoCl2對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制作用。②將A549細(xì)胞分為CoCl2處理組、乏氧+YC-1處理組、照射組:CoCl2處理組為依次添加終濃度為0、75、150、300、450μmol/L的CoCl2溶液;乏氧+YC-1組:首先先添加150

2、μmol/L的CoCl2溶液，培養(yǎng)24h后再添加終濃度為0、1、10、50、100μmol/L的YC-1溶液;照射組分為常氧照射組（RT）、乏氧照射組（H+RT）、聯(lián)合照射組（3個(gè)亞組）:乏氧+照射后加入YC-1組(H+RT→Y，照射24h后加入YC-1溶液);乏氧+YC-1后再照射組（H+Y→ RT，加入YC-1溶液24h后接受照射）;同時(shí)進(jìn)行組(H+Y+RT，在照射前半小時(shí)內(nèi)加入YC-1)，應(yīng)用RT-PCR、Western Blot

3、法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)4h、24h和48h后HIF-1a、VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。③免疫細(xì)胞熒光法觀察上述各處理組細(xì)胞培養(yǎng)24h后HIF-1a蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示CoCl2對(duì)A549細(xì)胞有增殖抑制作用，呈明顯的時(shí)間-劑量依賴性。RT-PCR與Western Blot均顯示常氧下A549細(xì)胞即有一定量HIF-1a、VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)，而CoCl2可增強(qiáng)其表達(dá)，在24h內(nèi)呈時(shí)間-劑量依賴

4、性。YC-1在1-50μmol/L濃度內(nèi)，HIF-1a蛋白、VEGF mRNA和蛋白表達(dá)均逐漸受抑;但HIF-1a mRNA表達(dá)水平不隨YC-1濃度的升高以及時(shí)間的延長(zhǎng)而變化，均呈較強(qiáng)表達(dá)，與乏氧對(duì)照組無(wú)差異（P均＞0.05）。X線照射可誘導(dǎo)A549細(xì)胞高表達(dá)HIF-1a、VEGF mRNA和蛋白，而YC-1可抑制其表達(dá)，呈時(shí)間依賴性。H+Y+RT組的HIF-1a、VEGFmRNA和蛋白表達(dá)下降最明顯，H+RT→Y次之，H+Y→RT下降