羅格列酮下調人肺腺癌A549細胞VEGF表達作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討過氧化物酶體增殖因子活化受體（proliferator-adtivated receptor gammar PPARγ）配體羅格列酮（Rosiglitazone RSG）對肺腺癌血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor VEGF)表達的調節(jié)作用,揭示RSG抑制肺腺癌血管生成的機制。旨在為肺腺癌抗腫瘤血管治療提供理論和實驗依據。 方法：體外培養(yǎng)人肺腺癌細胞株A549,不同

2、濃度RSG孵育24h后,采用兩步非生物素免疫組化（PV）法檢測用藥前后A549細胞VEGF蛋白表達；逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測用藥前后A549細胞PPARγ、VEGFmRNA表達。 結果： 免疫組化結果顯示A549細胞存在VEGF蛋白表達。如圖所見，VEGF蛋白陽性信號主要見于A549細胞核膜周圍和胞質內，與對照組比較，1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號減

3、弱，未見表達位置改變。對照組、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組積分光密度（Integrated optical density IOD）分別為2602.45±149.27、2381.32±151.16、1794.18±142.25、938.26±121.32、645.43±136.11、861.31±124.17、2574.64±154.21。10μmol.L-1RSG組IOD為645.43±136.

4、11，表達較對照組IOD 2602.45±149.27明顯減少（P＜0.01.n=6），10μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號減弱最強，≥20μmol.L-1RSG組陽性信號減弱減少，100μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號減弱不明顯，其VEGF蛋白陽性信號與對照組比較表達無統(tǒng)計學差異（P＞0.05.n=6）。100ng.ml-1TNP-470組IOD為957.21±148.12，10μmol.L-1RSG組（645

5、.43±136.11）較100ng.ml-1TNP-470組（957.21±148.12）VEGF陽性信號減弱明顯,GW9662阻斷后的10μmol.L-1RSG組的IOD為1302.53±154.34，對VEGF信號抑制作用減弱（P＜0.01，n=6）。 RT-PCR結果顯示A549細胞存在PPARγmRNA表達，且≥2.5μmol.L-1RSG呈濃度依賴方式上調PPARγmRNA的表達（P＜0.01或p＜0.05.n=6）。

6、對照組、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組PPARγmRNA表達的相對灰度值％分別為：78.71±5.67、79.75±6.45、90.29±4.87、90.50±5.07、103.22±7.52、119.65±9.32、148.51±11.27；RT-PCR結果也顯示A549細胞存在VFGEmRNA表達。與對照組比較，RSG組VEGFmRNA表達明顯下調。對照組、1.25、2.5、5.0、10、20、

7、100μmol.L-1RSG組VEGFmRNA表達的相對灰度值％分別為：99.16±13.23、68.82±9.49、56.53±3.53、48.57±2.95、16.74±0.93、49.56±4.97、75.63±5.45。可見1.25μmol.L-1 RSG組VEGFmRNA表達已明顯下調，10μmol.L-1RSG組下調作用最強，≥20μmol.L-1RSG組下調作用減弱，100μmol.L-1RSG組下調作用不明顯，與對照組比

8、較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05 n=6）；并且10μmol.L-1RSG組（16.74±0.93）較100ng.ml-1TNP-470組（37.69±5.94）下調VEGF作用更明顯（P＜0.01.n=6），PPARγ阻斷劑GW9662組（41.63±1.43）明顯拮抗RSG下調VEGF的作用(P<0.01 n=6)。 結論： 1.人肺腺癌A549細胞存在PPARγ和VEGF的表達。 2.羅格列酮呈濃度依賴方式上調