Raf激酶抑制蛋白影響卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 卵巢癌SKOV-3細(xì)胞株轉(zhuǎn)染Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein，RKIP）基因后，觀察細(xì)胞在抗腫瘤藥物順鉑作用下的增殖、凋亡及周期情況，研究RKIP對(duì)卵巢癌細(xì)胞化療敏感性的影響，初步探討RKIP抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將含有人全長(zhǎng)RKIP的真核表達(dá)重組質(zhì)粒導(dǎo)入卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3中，并設(shè)置

2、未轉(zhuǎn)染SKOV-3細(xì)胞和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞做對(duì)照，使用G418篩選陽性細(xì)胞。
　　 2.應(yīng)用免疫印漬（Western Blot）檢測(cè)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染前后人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的RKIP蛋白表達(dá)水平。
　　 3.應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染前后人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的mRNA表達(dá)水平。
　　 4.應(yīng)用單溶液增殖檢測(cè)法（MTS）觀察RKIP在順鉑作用下對(duì)人卵巢癌細(xì)胞增殖的抑制作用。

3、r>　　 5.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）觀察RKIP在順鉑作用下對(duì)人卵巢癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡情況以及對(duì)細(xì)胞周期的影響
　　 結(jié)果：
　　 1.通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，成功構(gòu)建RKIP表達(dá)上升的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞株，以及對(duì)應(yīng)的空質(zhì)粒的細(xì)胞株。
　　 2.不同濃度順鉑（0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml和10μg/ml）作用24、48、72hrs均能抑制SKOV-3細(xì)胞的增殖，但RKI

4、P轉(zhuǎn)染后增殖抑制與未轉(zhuǎn)染組照組比較均有顯著性差異（P<0.05），順鉑對(duì)轉(zhuǎn)染RKIP組SKOV-3的抑制更為明顯，增殖抑制率明顯上升。
　　 3.濃度為2.5μg/ml的順鉑作用24hrs后，轉(zhuǎn)染組凋亡率為（10.86±0.73）％，明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組[未轉(zhuǎn)染組（4.27±0.67）％，轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組（4.02±0.43）％]，在無順鉑作用情況下，凋亡率為（3.11±0.78）％，仍然高于未轉(zhuǎn)染組（1.51±0.13）％和轉(zhuǎn)染空質(zhì)

5、粒組（1.97±0.46）％，結(jié)果有顯著性差異（P<0.01）。
　　 4.濃度為2.5μg/ml的順鉑作用24hrs后，經(jīng)周期檢測(cè)G0/G1期的比例下降，S期的比例增加，與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05），RKIP基因的轉(zhuǎn)染促進(jìn)了卵巢癌細(xì)胞S期阻滯。
　　 結(jié)論：
　　 過表達(dá)RKIP對(duì)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞株產(chǎn)生了一系列影響，可以增加順鉑對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率，增加順鉑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的敏感性，并影響腫瘤