PDCD5和TRAIL誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：本研究目的是檢測研究PDCD5對胃癌MKN28細(xì)胞凋亡的作用，觀察腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)對人胃癌細(xì)胞(MKN28細(xì)胞株)的抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)，并研究此過程中Capase-3的表達規(guī)律及與凋亡效應(yīng)的相關(guān)性，探討TRAIL誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡的可能機制，探討TRAIL與PDCD5聯(lián)用對MKN28細(xì)胞是否具有協(xié)同殺傷作用，并初步探討其作用機制，以期尋找治療胃癌可靠的生物抗腫瘤新方法。 方法：MKN28細(xì)胞用

2、含10％胎牛血清的RPMI Medium 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，置37℃、5％CO2孵育箱中孵育。取指數(shù)生長期細(xì)胞，分對照組、TRAIL組、PDCD5組、TRAIL+PDCD5組，采用MTT比色法分析細(xì)胞增殖抑制率及細(xì)胞存活率：通過倒置顯微鏡、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化；運用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期；免疫組化方法檢測細(xì)胞Caspase-3的表達水平；AO/EB染色進行觀察細(xì)胞凋亡；數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件分

3、析。 結(jié)果：MTT比色法及FCM結(jié)果顯示TRAIL、PDCD5+TRAIL對MKN28細(xì)胞具有較明顯的劑量依賴性的抑制增殖、促進凋亡的效應(yīng)，這種效應(yīng)可能與CaSpaSe-3表達上調(diào)有關(guān)，PDCD5組無明顯變化。倒置顯微鏡下觀察到TRAIL、PDCD5+TRAIL作用后的MKN28細(xì)胞出現(xiàn)體積變小、變圓、細(xì)胞膜發(fā)泡等凋亡現(xiàn)象。用AO/EB染色法熒光顯微鏡下觀察到典型的早期及晚期凋亡的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。細(xì)胞免疫組化測Caspase-3

4、在TRAIL單獨及聯(lián)合PDCD5作用后MKN28細(xì)胞中的表達結(jié)果：CaSpase-3在MKN28細(xì)胞中呈低表達，在TRAIL單獨作用和TRAIL+PDCD5聯(lián)合作用后的MKN28細(xì)胞中表達呈上升趨勢且呈劑量依賴性。 結(jié)論：TRAIL在一定濃度劑量范圍內(nèi)，對MKN28細(xì)胞具有凋亡誘導(dǎo)作用，其作用具有量效關(guān)系。重組PDCD5蛋白單獨對MKN28細(xì)胞產(chǎn)生的影響并不明顯。但加入誘導(dǎo)凋亡的因素可明顯促進其凋亡，本研究采用的是與TRAIL聯(lián)

5、合應(yīng)用。PDCD5能促進TRAIL對MKN28細(xì)胞凋亡并呈劑量依賴性。表明PDCD5是凋亡促進劑而不是凋亡誘導(dǎo)劑。TRAIL聯(lián)合PDCD5可以高效誘導(dǎo)MKN28細(xì)胞凋亡。Caspase-3在胃癌MKN28細(xì)胞株中低表達，在經(jīng)TRAIL、TRAIL聯(lián)合PDCD5處理的胃癌MKN28細(xì)胞株中表達增高，并呈劑量依賴性。TRAIL聯(lián)合PDCD5對MKN28細(xì)胞的凋亡作用可能是通過上調(diào)Caspase-3的表達，延長了Caspase-3的半衰期，增