反義hTR基因誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該課題構(gòu)建了人hTR基因正、反義真核表達(dá)載體,通過基因轉(zhuǎn)染來觀察反義hTR基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞株MKN-45細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,以探討端粒酶作為胃癌反義基因治療靶目標(biāo)的潛在價值.該課題共分兩部分.第一部分：hTR基因片段的克隆及其正、反義真核表達(dá)載體的構(gòu)建.首先,采用RT-PCR方法從人胃癌細(xì)胞株MKN-45中克隆出人hTR基因部分cDNA片段.隨后采用重組DNA技術(shù)將該目的基因片段正向或反向插入pEF6/V5-His-TOPO載體中以構(gòu)

2、建人hTR基因正、反義真核表達(dá)載體.最后,對所構(gòu)建的載體均進(jìn)行酶切鑒定和測序鑒定并證明與原始設(shè)計相一致.第二部分：反義hTR基因誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞（MKN-45）凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.采用脂質(zhì)體法進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染,分別將人hTR基因正、反義真核表達(dá)體和空載體轉(zhuǎn)染入MKN-45細(xì)胞,通過藥物篩選,分別對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了正義載體、反義載體、空載體的MKN-45細(xì)胞及未經(jīng)處理的對照MKN-45細(xì)胞進(jìn)行如下檢測.結(jié)果表明：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了反義hTR基因的MKN-45細(xì)胞其