脂質(zhì)體生存素（survivin）反義基因治療抑制人胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的探討脂質(zhì)體生存素(survivin)反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)人胃癌細(xì)胞系HS-746T的抑制作用及其機(jī)理.方法設(shè)計(jì)合成survivin反義寡核苷酸(ASODN)轉(zhuǎn)染胃癌HS-746T細(xì)胞.分為空白對(duì)照組;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組,正義鏈轉(zhuǎn)染組,100、200和400nmol/L反義鏈轉(zhuǎn)染組.光鏡及透射電鏡觀(guān)察轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),用流質(zhì)細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后2、4、8、12、24、48h各組細(xì)胞增殖和凋亡指數(shù)(AI),采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)s

2、urvivin ASODN對(duì)細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),計(jì)算生長(zhǎng)抑制率(IR).逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)、Western blot蛋白免疫印跡法檢測(cè)各對(duì)照組及ASODN組轉(zhuǎn)染后survivin基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)的變化.目的探討脂質(zhì)體生存素(survivin反義寡核苷酸(ASODN)對(duì)人胃癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用及機(jī)理.方法將24只裸鼠建立人胃癌HS-746T皮下移植瘤模型,用不同的轉(zhuǎn)染液處理后隨機(jī)

3、分成6組.于注射后2,4,8,12,16,20日觀(guān)測(cè)裸鼠移植瘤體積,計(jì)算抑瘤率和腫瘤縮小率,觀(guān)察移植瘤細(xì)胞形態(tài)變化,免疫組化SP法檢測(cè)survivin的表達(dá),并用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印跡法比較治療后不同時(shí)間各組腫瘤組織中survivin mRNA和蛋白表達(dá)的變化.目的探討分裂原激活的蛋白激酶家族(MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與脂質(zhì)體生存素(survivin)反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞系H

4、S-746T凋亡的關(guān)系.方法設(shè)計(jì)合成survivin反義寡核苷酸(ASODN)轉(zhuǎn)染胃癌HS-746T細(xì)胞,分空白對(duì)照組、脂質(zhì)體和正義鏈轉(zhuǎn)染組,100、200、400nmol/L反義鏈轉(zhuǎn)染組及P38MAPK、ERKl/2抑制劑組.用流質(zhì)細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后2、4、8、12、24、48h各組細(xì)胞增殖和凋亡指數(shù).免疫細(xì)胞化學(xué)染色法、Western blot蛋白免疫印跡法、免疫沉淀法及激酶活性測(cè)定法檢測(cè)各對(duì)照組及ASODN組轉(zhuǎn)染后P38MAPK、E