RNA干擾在人胃癌細胞SGC7901中抑制survivin基因的體外實驗研究.pdf

1、目的：研究小干擾RNA對人胃癌SGC7901細胞survivin表達及細胞生長的抑制作用。 方法：采用體外培養(yǎng)胃癌SGC7901細胞，利用lipofectaminen<'TM>2000將survivin特異性小干擾RNA轉(zhuǎn)染給胃癌SGC7901細胞來敲除survivin的表達。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和Western blotting測定survivinmRNA和蛋白的表達。甲基噻唑基四唑(MTT)用來分析不同濃度

2、、不同時間點survivin小干擾RNA對癌細胞的生長抑制作用。用流式細胞術(shù)檢測survivin siRNA對細胞周期和細胞凋亡的影響。 結(jié)果：經(jīng)轉(zhuǎn)染siRNA后，RT-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染survivin siRNA組，轉(zhuǎn)染non-silencing siRNA組以及未處理組survivin基因mRNA表達強度分別為(29.4±2.5)﹪，(50.3±3.2)﹪和(53.1±3.1)﹪，轉(zhuǎn)染survivin siRNA組的SG

3、C7901細胞survivin基因mRNA的表達水平和兩對照組相比顯著下降(p<0.01)；轉(zhuǎn)染survivin siRNA后48h survivin mRNA抑制率為(44.52±4.1)﹪； Western blotting 結(jié)論：各組細胞survivin蛋白表達強度分別為(21.3±2.4)﹪，(31.0±3.6)﹪和(35.6±2.0)﹪，轉(zhuǎn)染survivin siRNA組的SGC7901細胞survivin基因蛋白表達

4、水平和兩對照組相比顯著下降(p<0.01)，轉(zhuǎn)染survivin特異siRNA后48h蛋白抑制率為(40.17±5.71)﹪，說明小干擾RNA能有效地抑制胃癌SGC7901中survivin表達。MTT檢測顯示：用不同濃度，不同時間轉(zhuǎn)染后，發(fā)現(xiàn)100nmol 48h抑制率最顯著。流式細胞儀細胞周期及凋亡率測定結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染survivin siRNA后，SGC7901陽性實驗組出現(xiàn)G<,0>/G<,1>期細胞增多(38.2﹪→88.6﹪

5、)，在S期和G2/M期細胞數(shù)下降，并在轉(zhuǎn)染48 h后，凋亡率升高。轉(zhuǎn)染survivin siRNA組凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染non-silencingsiRNA組以及未處理組(P<0.01)。結(jié)論：survivin在胃癌SGC7901細胞中高表達。轉(zhuǎn)染survivin siRNA后，survivin表達顯著受到抑制；下調(diào)survivin后，可以在體外顯著抑制腫瘤細胞的生長，抑制survivin的表達可以誘導胃癌SGC?901細胞凋亡。surv