CD44反義基因逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:為了探討切斷CD44介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸途徑,增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤作用,該研究采用反義基因技術(shù),設(shè)計(jì)并合成了CD44反義寡核苷酸(ASODN),并進(jìn)行硫代化修飾,以脂質(zhì)體包裹,形成反義寡核苷酸-脂質(zhì)體復(fù)合物,轉(zhuǎn)導(dǎo)入人低分化黏液腺胃癌細(xì)胞系MGC80-3細(xì)胞,從基因-蛋白-細(xì)胞效應(yīng)多層次水平,觀察CD44反義基因下調(diào)CD44表達(dá)的作用,觀察CD44ASODN對(duì)腫瘤細(xì)胞Fas及凋亡相關(guān)基因bcl-2的影響,提高CD3AK免疫效應(yīng)細(xì)胞的識(shí)別殺

2、傷能力,進(jìn)一步闡明CD44介導(dǎo)免疫逃逸的詳細(xì)機(jī)制,揭示CD44分子介導(dǎo)免疫抑制和反義CD44逆轉(zhuǎn)免疫抑制作用的分子機(jī)制,逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫逃逸,為CD44反義基因的腫瘤生物治療,提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).結(jié)論:1.人胃癌細(xì)胞系MGC80-3高表達(dá)的CD44分子,與其配體低分子量HA結(jié)合后,使細(xì)胞表面同時(shí)高表達(dá)的Fas分子表達(dá)下調(diào);細(xì)胞內(nèi)凋亡抵抗基因bcl-2表達(dá)上調(diào),抑制了CD3AK細(xì)胞FasL和抗Fas抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;同時(shí)增殖活性增高,在

3、體外表現(xiàn)出明顯的免疫抑制作用.2.CD44ASODN轉(zhuǎn)導(dǎo)MGC80-3細(xì)胞后,有效地封閉并抑制CD44mRNA和CD44蛋白的表達(dá).3.在CD44配體低分子量HA存在的環(huán)境中,CD44ASODN可有效地增加MGC80-3細(xì)胞Fas分子的表達(dá),并顯著地增加MGC80-3細(xì)胞對(duì)FasmAb誘導(dǎo)凋亡的敏感性.4.CD44ASODN可有效地抑制MGC80-3細(xì)胞的增殖活性.5.CD44ASODN增強(qiáng)MGC80-3細(xì)胞對(duì)CD3AK的殺傷敏感性,并