脂質(zhì)體介導(dǎo)Survivin反義寡核苷酸增強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株HepG2凋亡的研究.pdf

1、目的：肝癌(hepatocelular carcinoma，HCC)，是我國最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高、預(yù)后差，嚴(yán)重威脅著人類生命與健康。目前，手術(shù)切除仍是治療HCC首選和較有效的方法。化療是HCC一項(xiàng)重要的輔助治療手段，但對(duì)正常細(xì)胞的毒性和腫瘤細(xì)胞的耐藥性是化療面臨的兩大難題。研究表明，Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，并具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期雙重功能，與腫瘤的化療耐藥性密切相關(guān)。本課題利用脂質(zhì)體介導(dǎo)Sur

2、vivin反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，ASODN)研究其增強(qiáng)阿霉素(adriamycin，ADM)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞猾亡的作用。
　　 方法：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Survivin ASODN進(jìn)入肝癌細(xì)胞，運(yùn)用RT-PCR和Western blot檢測(cè)Survivin的變化，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制，流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)肝癌細(xì)胞的凋亡率。用ADM處理后，M

3、TT比色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制，F(xiàn)CM檢測(cè)細(xì)胞的凋亡指數(shù)的變化。
　　 結(jié)果：在轉(zhuǎn)染了Survivin的ASODN24小時(shí)后，ASODN Survivin各組均顯示mRNA和蛋白的表達(dá)下調(diào)，以800ng/ml組最為明顯，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)；MTT發(fā)現(xiàn)Survivin ASODN處理后各組細(xì)胞增殖活性均有不同程度降低；FCM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞在400ng/ml，600ng/ml，800ng/ml組的ASOD

4、N在作用24小時(shí)后凋亡率可分別為7.45±0.14％，13.15±0.37％，35.75±0.68％，與對(duì)照空白組0.54±0.05％和SODN轉(zhuǎn)染組0.56±0.08％比較有顯著性差異(P<0.05)。在加用ADM后，600ng/mlASODN組的細(xì)胞凋亡率可達(dá)41.35±0.68％，與單獨(dú)使用ADM和轉(zhuǎn)染ASODN后的凋亡率16.94+±.54％和15.07±0.35％比較有顯著性差異。而MTT比色實(shí)驗(yàn)顯示空白對(duì)照組與ADM組和AS

5、ODN組在轉(zhuǎn)染細(xì)胞24小時(shí)后，細(xì)胞增殖抑制有明顯的差異(P<0.05)，而ADM+ASODN組與其余三組比較均有顯著性差異(P<0.05)。
　　 結(jié)論：采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染針對(duì)Survivin設(shè)計(jì)的ASODN，能封閉Survivin基因，下調(diào)Survivin蛋白及mRNA的表達(dá)，并促進(jìn)HepG2細(xì)胞的凋亡及抑制肝癌細(xì)胞生長。ASODN封閉Survivin的表達(dá)能加強(qiáng)ADM誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，推測(cè)其可增加ADM化療敏感性，改善常規(guī)化