survivin反義寡核苷酸誘導(dǎo)hep-2細(xì)胞株凋亡及對(duì)放療的增敏作用.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文survivin反義寡核苷酸誘導(dǎo)hep2細(xì)胞株凋亡及對(duì)放療的增敏作用姓名：屈永濤申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：尚耀東李曉明20050301中文摘要100nmolmIASODN轉(zhuǎn)染組III組:200nmolm1ASODN轉(zhuǎn)染組IV組:400nmolmIASODN轉(zhuǎn)染組:V組:600nmolm1ASODN轉(zhuǎn)染組，每組設(shè)3個(gè)平行孔，基因轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集1X10個(gè)細(xì)胞，采用異硫氰酸肌法提取總RNA.分別

2、取等量總RNA采用20ul反應(yīng)體系按照cDNA試劑盒說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后取4ul逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將PCR產(chǎn)物以1.5%瓊脂糖凝膠電泳，紫外線燈下觀察并照相。(4)、流式細(xì)胞儀檢測射線照射后細(xì)胞凋亡率及survivin蛋白的變化，取對(duì)數(shù)生長期hep2細(xì)胞以200nmolm1ASODN進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后置37C5%COZ培養(yǎng)箱中孵育至24h。分別給予。，248Gy射線照射，每組設(shè)3個(gè)平行孔，照射后繼續(xù)置370C5%CO

3、:培養(yǎng)箱中孵育24h，收獲細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液，送流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果:(1)、在熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)各濃度的反義寡核昔酸(100nmol1600nmol1)實(shí)驗(yàn)組hep2細(xì)胞形態(tài)有不同程度的改變，表現(xiàn)為細(xì)胞休積變小，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞皺縮，核固縮，胞漿粗糙和分裂相少見等。而正常對(duì)照hep2細(xì)胞形態(tài)完整，貼壁生長良好。各濃度帶FITC標(biāo)記的survivin反義寡核昔酸轉(zhuǎn)染細(xì)胞后6小時(shí)于熒光顯微鏡下觀察均可見綠色熒光，熒光分布主要積聚于細(xì)