TRAIL聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)HEP-2、HNE-1細(xì)胞株凋亡的研究.pdf

1、目的：觀察不同濃度的TRAIL、化療藥物(5-FU、DDP)分別和聯(lián)合對HNE-1、HEP-2細(xì)胞株增殖、凋亡的影響并探討其可能機(jī)制。 方法：1采用MTT檢測不同濃度的TRAIL(1.0，10.0，100.0,1000.0ng/ml)；DDP(1.0，1 0.0，100.0μg/ml)；5-FU(1.0，1 0.0，1 00.0μg/ml)對HEP-2、HNE-1細(xì)胞株的增殖抑制作用。依據(jù)結(jié)果將實(shí)驗(yàn)分組為5組即空白對照組(無藥物

2、)；TRAIL(10.0ng/ml)處理組；DDP(1.0μg/ml)處理組；5-FU(1.0μg/ml)處理組；DDP(1.0μg/ml)+TRAIL(1 0.0ng/ml)處理組；5-FU(1.0μg/ml)+TRAIL(10.0ng/ml)處理組進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)；2采用MTT法檢測不同處理組分別對HNE-1和HEP-2增殖抑制的影響；3 采用FCM法檢測Annexin V-FITC/PI雙染色細(xì)胞后不同處理組細(xì)胞的凋亡，熒光顯微鏡下觀

3、察細(xì)胞形態(tài)；4采用Western-blot法檢測不同處理組細(xì)胞中細(xì)胞型Fas相關(guān)死亡域樣白介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白(Celluar Fas-ssociated death domain-like IL-1 beta converting enzyme inhibitory protein，c-FLIP)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(Nuclear factors κB，NF-κB)的表達(dá)情況。 結(jié)果： ㈠ TRAIL聯(lián)合5-FU、DD

4、P對HEP-2細(xì)胞株的研究。1)濃度為1.0μg/ml的5-FU、DDP可以抑制HEP-2細(xì)胞株的增殖，1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HEP-2細(xì)胞株的增殖，10.0ng/ml以上濃度的TRAIL可抑制HEP-2細(xì)胞株的增殖。選取藥物濃度為5-FU1.0μg/ml，DDP1.0μg/ml，TRAIL10.0ng/ml進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)；2)DDP+TRAIL處理組HEP-2細(xì)胞株抑制率為(33.69±3.50)％，與TRAIL處理組

5、(5.73±4.31)％和DDP處理組(15.06±8.83)％相比，HEP-2細(xì)胞株抑制率明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3)5-FU+TRAIL處理組HEP-2細(xì)胞株抑制率為(29.21±9.80)％，與TRAIL處理組(5.73±4.31)％和5-FU處理組(12.68±5.20)％相比，HEP-2細(xì)胞株抑制率明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4)DDP+TRAIL處理組HEP-2細(xì)胞株凋亡率為(24.76+1.20)％，與TRAIL處

6、理組(0.24+0.023)％和DDP處理組(14.70±2.21)％相比，HEP-2細(xì)胞株凋亡率明顯提高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；5)5-FU+TRAIL處理組HEP-2細(xì)胞株凋亡率為(14.33±0.78)％，與TRAIL處理組(0.24±0.023)％和5-FU處理組(2.25±0.56)％相比，HEP-2細(xì)胞株凋亡率明顯提高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6)TRAIL處理組、5-FU處理組、DDP處理組中c-FLIP、NF-□B蛋白的表達(dá)水平高

7、于TRAIL+5-FU處理組和TRAIL+DDP處理組。 ㈡ TRAIL聯(lián)合5-FU、DDP對HNE-1細(xì)胞株的研究。1)濃度為1.0μg/L的5-FU、DDP可以抑制HNE-1細(xì)胞株的增殖，1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HNE-1細(xì)胞株的增殖，10.0ng/ml以上濃度的TRAIL可抑制HNE-1細(xì)胞株的增殖。選取藥物濃度為5-FU 1.0μg/ml，DDP 1.0μg/ml，TRAIL 10.0ng/ml進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)

8、驗(yàn)；2)DDP+TRAIL處理組HNE-1細(xì)胞株抑制率為(38.61±7.56)％，與TRAIL處理組(5.73±4.42)％和DDP處理組(14.62±7.92)％相比，HNE-1細(xì)胞株抑制率明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3)5-FU+TRAIL處理組HNE-1細(xì)胞株抑制率為(31.89±5.61)％，與TRAIL處理組(5.73±4.42)％和5-FU處理組(14.17±9.6)％相比，HNE-1細(xì)胞株抑制率明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義；4)DDP+TRAIL處理組HNE-1細(xì)胞株凋亡率為(14.72±1.20）％，與TRAIL處理組(0.66±0.23)％和DDP處理組(2.1 9±0.52)％相比，HNE-1細(xì)胞株凋亡率明顯提高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；5)5-FU+TRAIL處理組HN-1細(xì)胞株凋亡率為(14.70±1.78)％，與TRAIL處理組(0.66±0.23)％和5-FU處理組(2.43±0.26)％相比，HNE-1細(xì)胞株凋亡率明顯提高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

10、；6)TRAIL處理組、5-FU處理組、DDP處理組中c-FLIP、NF-kB蛋白的表達(dá)水平高于TRAIL+5-FU處理組和TRAIL+DDP處理組。 結(jié)論：①TRAIL能誘導(dǎo)HEP-2、HNE-1細(xì)胞株的增殖，且與5-FU、DDP聯(lián)合應(yīng)用具協(xié)同抑制細(xì)胞株增殖的作用；②TRAIL能誘導(dǎo)HEP-2、HNE-1細(xì)胞株的凋亡，且與5-FU、DDP聯(lián)合應(yīng)用能協(xié)同誘導(dǎo)HEP-2、HNE-1細(xì)胞株的凋亡；③在TRAIL聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)HEP