10種化療藥物誘導(dǎo)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat凋亡的研究.pdf

1、目的：探索10種臨床常用化療藥物對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用，為TCL臨床化療方案的選擇提供初步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)選用Jurkat細(xì)胞株作為研究對(duì)象，將臨床常用的10種化療藥以不同濃度（終濃度的0.25、0.50、0.75、1.00）分別作用于對(duì)數(shù)生長期的Jurkat細(xì)胞24h、48h、72h，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制率；收集不同藥物作用24h后的細(xì)胞，采用Annexi

2、n V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。選擇單藥敏感的藥物聯(lián)合使用，聯(lián)用方案中各藥物濃度同單藥處理濃度,再次采用MTT及Annexin V/PI雙染法測(cè)定細(xì)胞的增殖抑制率及凋亡率；并使用倒置顯微鏡觀察Jurkat細(xì)胞生長的形態(tài)學(xué)變化、Hoechst33258染色后熒光顯微鏡下觀察藥物處理 Jurkat細(xì)胞后核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化、DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)凋亡梯度。
　　結(jié)果：⑴在單藥體外敏感實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞增殖抑制率的大小依次為：表柔比星>長

3、春瑞濱>吉西他濱>多西他賽>環(huán)磷酰胺>順鉑>紫杉醇>長春新堿>利妥昔單抗>門冬酰胺酶；其中表柔比星達(dá)到高度敏感，長春瑞濱、吉西他濱、多西他賽達(dá)到中度敏感。Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果與MTT結(jié)果一致，且與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。⑵在聯(lián)合藥物體外敏感實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞增殖抑制率的大小依次為：表柔比星+吉西他濱+長春瑞濱>表柔比星+吉西他濱+多西他賽。Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果與M

4、TT結(jié)果一致，與陰性對(duì)照組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與單藥組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，可見實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖緩慢，輪廓不清晰，體積皺縮變小，包膜不完整，核染色質(zhì)固縮濃集，出現(xiàn)凋亡小體。Hoechst33258染色后以紫外光340nm波長激發(fā)，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核染色質(zhì)，可見凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，呈強(qiáng)藍(lán)色。從實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中提取的DNA經(jīng)電泳后，紫外燈下可見特征性的“