硼替佐米對淋巴瘤細胞株Raji細胞增殖凋亡影響機制的研究.pdf

1、目的:淋巴瘤是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤，起源于淋巴組織和淋巴結(jié)，機體在免疫應(yīng)答時，各種淋巴免疫細胞增殖分化，其中某一種細胞惡變將導致淋巴瘤的發(fā)生。一般來講，傳統(tǒng)化療方案（如CHOP，COP等）對淋巴瘤患者初期的治療效果較好，但是一部分患者在緩解后數(shù)月至數(shù)年內(nèi)復發(fā)。故當前的一個首要任務(wù)就是尋求新藥及新化療方案。國外研究表明，體外單用硼替佐米或與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用，對多種淋巴瘤細胞株有增殖抑制作用。SHP-1是一68kD的非跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，它

2、含有SH2結(jié)構(gòu)域，主要在造血細胞中表達，是調(diào)節(jié)細胞內(nèi)磷酸化水平的關(guān)鍵調(diào)控因子，通過對下游信號蛋白分子脫磷酸化而終止細胞生長信號或激活凋亡信號。
　　 本實驗擬從細胞生物學行為的角度，研究細胞的生長增殖，研究細胞凋亡及相關(guān)凋亡基因的表達，從而探討硼替佐米對Raji細胞株的影響，并了解在該過程當中SHP-1基因所起的作用，以便尋找更多的新治療靶點，為臨床新藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:用細胞培養(yǎng)的方法，傳代培養(yǎng)Raj

3、i細胞株，用生理鹽水將硼替佐米稀釋成不同濃度，分別對Raji細胞進行干預(yù)，并于干預(yù)后不同時間收取各組細胞。細胞增殖抑制率通過MTT法來檢測，細胞凋亡率通過流式細胞術(shù)來檢測，應(yīng)用藥物前后細胞中SHP-1基因mRNA的表達情況通過實時定量PCR的方法來檢測，同時檢測應(yīng)用藥物前后c-kit、NF-κB、JAK1和caspase-3基因mRNA的表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、硼替佐米對Raji細胞有明顯的抑制增殖作用，且增

4、殖抑制率與藥物濃度及藥物作用時間呈正相關(guān)。
　　 2、硼替佐米對Raji細胞有明顯的促進凋亡作用，且細胞凋亡率與藥物濃度及藥物作用時間呈正相關(guān)。
　　 3、Raji細胞受硼替佐米干預(yù)后，細胞中SHP-1mRNA表達的變化情況。
　　 (1)硼替佐米處理組與未加藥物組相比，Raji細胞中SHP-1mRNA相對表達量更高，P＜0.05，有統(tǒng)計差異。
　　 (2)硼替佐米干預(yù)時間相同時，SHP-1mRNA的表達

5、水平隨著藥物濃度的增加而升高，P＜0.05，有統(tǒng)計差異。
　　 (3)硼替佐米干預(yù)濃度相同時，SHP-1mRNA的表達水平隨著藥物作用時間的延長而升高，P＜0.05，有統(tǒng)計差異。
　　 4、濃度梯度的硼替佐米處理Raji細胞24小時后，用實時定量PCR的方法檢測細胞內(nèi)c-kit、NF-κB、JAK1基因mRNA的表達水平，與未加藥物組相比較，上述基因表達水平降低明顯，P＜0.05，且其相對表達量與藥物濃度呈負相關(guān)。同樣方

6、法檢測caspase-3基因mRNA的表達水平，與未加藥物組相比較，該基因表達水平升高明顯，P＜0.05，且其相對表達量與藥物濃度呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論:硼替佐米可以抑制Raji細胞增殖并誘導其凋亡，使SHP-1mRNA的表達升高，且與藥物濃度和作用時間呈正相關(guān)，同時使caspase-3基因mRNA的表達升高，使c-kit、NF-κB、JAK1基因mRNA的表達降低。硼替佐米誘導Raji細胞凋亡的過程，可能受到SHP-1基因及以