白藜蘆醇誘導(dǎo)人T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的： 1．確定白藜蘆醇(resveratrol，Res)是否可以誘導(dǎo)人T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞進(jìn)入凋亡；描述該細(xì)胞凋亡具體情況，包括細(xì)胞膜、細(xì)胞核、染色體、凋亡小體、空泡以及細(xì)胞器等的變化。 2．定量檢測(cè)并分析該細(xì)胞凋亡時(shí)對(duì)藥物的時(shí)間和劑量依賴情況，以及增殖活性、細(xì)胞周期變化情況等；3．初步探索該細(xì)胞系凋亡機(jī)理，了解相關(guān)基因(β-actin、bax、caspase-3、bcl-2、BCL-XL、AIF等)的表達(dá)以及對(duì)凋

2、亡的調(diào)控情況，探索該細(xì)胞系在該藥物誘導(dǎo)下的凋亡通路。 方法： 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)，按預(yù)設(shè)方案添加Res處理細(xì)胞樣品；主要通過(guò)核酸電泳檢測(cè)DNA變化情況，并初步推斷細(xì)胞凋亡時(shí)間；運(yùn)用熒光顯微鏡技術(shù)，Wright-Giemsa染色以及電子顯微鏡來(lái)檢測(cè)并分析凋亡的形態(tài)變化、事件發(fā)生時(shí)間等；運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)、MTT法定量檢測(cè)并分析該細(xì)胞對(duì)藥物的時(shí)間、劑量依賴性及增殖活性、細(xì)胞周期變化等；運(yùn)用蛋白印跡技術(shù)(Wester

3、n blotting)檢測(cè)凋亡的相關(guān)因子的表達(dá)變化及可能的凋亡路徑。 結(jié)果： 1．Res誘導(dǎo)人T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞凋亡，顯示典型的凋亡特征，包括：DNA Ladder?，F(xiàn)象；染色質(zhì)高度凝聚形成致密質(zhì)塊，凝聚的染色質(zhì)出現(xiàn)邊聚化現(xiàn)象；胞漿濃縮而出現(xiàn)空泡結(jié)構(gòu)；線粒體膨大、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張但結(jié)構(gòu)均完整；核膜凹陷然后逐漸破裂；細(xì)胞形成若干個(gè)仍由質(zhì)膜包裹凋亡小體；等。 2．Res誘導(dǎo)人T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞凋亡，在一定范圍內(nèi)

4、呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴性，且Res可以阻滯該細(xì)胞系于GO/G1期，使細(xì)胞分裂、增殖進(jìn)度受抑。 3．研究發(fā)現(xiàn)，Res誘導(dǎo)人T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞12h時(shí)，細(xì)胞已進(jìn)入凋亡途徑，24h時(shí)已有相當(dāng)數(shù)量的Juekat細(xì)胞進(jìn)入凋亡后期，經(jīng)過(guò)48h時(shí)絕大多數(shù)細(xì)胞進(jìn)入凋亡后期，也就是說(shuō)Res誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞系凋亡的時(shí)間依賴性在48h以內(nèi)，以后隨時(shí)間延長(zhǎng)抑制效果會(huì)逐漸減弱。 4．研究發(fā)現(xiàn)，0.2mmol/L的Res濃度在24h內(nèi)可以使初