Survivin反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對人乳腺癌細胞系MCF-7生長及對長春瑞濱增敏作用.pdf

1、研究背景與目的: Survivin屬于凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成員，呈組織與周期特異性高表達于人類大多數(shù)腫瘤組織，并且與腫瘤細胞的凋亡、細胞周期、增殖及對化療藥物的敏感性密切相關(guān)。本研究旨在探討survivin反義寡核苷酸（ASODN）對人乳腺癌細胞系MCF-7的誘導凋亡、特異性周期阻滯、抑制增殖等生物學行為及對長春瑞濱的增敏作用。 研究方法:

2、用脂質(zhì)體介導survivin-ASODN轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞系MCF-7，實驗采用半定量RT-PCR方法檢測MCF-7細胞中survivin基因mRNA的表達，Western blot方法檢測survivin基因蛋白的表達，Annexin V/PI雙染法通過流式細胞儀檢測細胞凋亡率變化，利于PI染色通過流式細胞儀檢測細胞周期時相變化，MTT比色法檢測細胞的增殖情況及對長春瑞濱的敏感性，電子顯微鏡下觀察反義轉(zhuǎn)染對乳腺癌細胞系MCF-7的凋亡誘

3、導下形態(tài)學變化。 研究結(jié)果: （1）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細胞48h后，survivin mRNA表達明顯下降，且在一定范圍內(nèi)其抑制效應呈濃度依賴趨勢。A200組、A400組、A600組分別下調(diào)至80.24％、68.52％、49.17％。與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同濃度反義轉(zhuǎn)染組之間相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 （2）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細

4、胞48h后，survivin蛋白表達明顯下降，且在一定范圍內(nèi)其抑制效應呈濃度依賴趨勢。A200組、A400組、A600組分別下調(diào)至75.14％、61.09％、29.73％。與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同時間和不同濃度反義轉(zhuǎn)染組之間相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 （3）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細胞后抑制細胞增殖，并呈時間、濃度依賴性。A200、A400、A600組的48h增殖抑制率分

5、別為35.25％、46.41％和60.36％，A600組24、48和的72h增殖抑制率分別為29.05％、60.36％和69.08％，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 （4）survivin-ASODN轉(zhuǎn)染MCF-7細胞后發(fā)生特異性周期阻滯，A600組細胞48h主要阻滯于G2/M期，該期細胞占（41.63±2.11）％，正常對照組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組、正義轉(zhuǎn)染組G2/M期的細胞比例分別為（20.86±0.72）％、（23.15±1.0

6、7）和（24.17±0.96）％，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。 （5）A600組細胞凋亡率較高，凋亡率達（18.39±1.06）％，正常對照組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組、正義轉(zhuǎn)染組凋亡率分別為（7.05±0.56）％、（6.09±0.61）％和（6.81±0.74）％，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 （6）survivin-ASODN增加MCF-7細胞對長春瑞濱的敏感性，ASODN組細胞存活率隨著長春瑞濱濃度的增高而下降，且下

7、降程度與ASODN濃度呈正相關(guān)關(guān)系，A200、A400、A600組的IC50值分別為（5.1±0.52）μg/mL，（4.6±0.57）μg/mL，（3.7±0.42）μg/mL；S600組、Lip組和正常組分別為（6.6±0.74）μg/mL，（6.8±0.81）μg/mL和（7.1±0.68）μg/mL，相比ASODN組的IC50值明顯下降，方差分析差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 （7）透射電子顯微鏡下觀察A600組細胞