靶向Bcl-xl mRNA低自由能區(qū)域的反義寡核苷酸對人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7體外增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的；觀察結(jié)合于Bcl-xlmRNA上低自由能區(qū)域的反義寡核苷酸對Bcl-xl基因的抑制效應(yīng)，以及對人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響 方法；基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低結(jié)合自由能區(qū)域，并針對這一區(qū)域合成反義核酸As587；轉(zhuǎn)染高表達(dá)Bcl-xl的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7；倒置顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；MTT法測定細(xì)胞增殖抑制率，RT-PCR檢測Bcl-xlmRNA水平；免疫

2、細(xì)胞化學(xué)方法檢測Bcl-xl蛋白表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡發(fā)生率。 結(jié)果；1.MCF-7細(xì)胞增殖受抑，且抑制效應(yīng)與寡核苷酸濃度、作用時間呈量效及時效關(guān)系 2.Bcl-xlmRNA及蛋白表達(dá)水平下降，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡 結(jié)論；1.As587能抑制Bcl-xl基因的表達(dá)，在體外能抑制乳腺癌細(xì)胞增殖 2.對于較短的mRNA，利用最小自由能原理對其設(shè)計反義核酸是一種可以信賴的方法，以此方法設(shè)計的反義核酸As58