PDGF-α受體反義寡核苷酸對體外視網膜色素上皮細胞增殖和凋亡的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 探討 PDGFR-α受體反義寡核苷酸對體外視網膜色素上皮(Retinal pigment epithelium, RPE)細胞的增殖和凋亡的作用,為PDGFR-α受體反義寡核苷酸用于防治增生性玻璃體視網膜病變提供實驗依據。
　　方法: 1.體外培養(yǎng)人視網膜色素上皮細胞株 HRPE,使用陽離子脂質體LipofectamineTM2000將不同質量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)靶向血小板源性生長因子α受體(PDGFR-

2、α)基因的ASODN轉染至細胞株RPE細胞,倒置顯微鏡下觀察RPE細胞的形態(tài)學改變。2.將不同質量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用 RPE細胞24、48、72h后,應用 MTT法間接檢測細胞增殖的變化,并計算抑制率。3.(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN作用RPE細胞48h后,Hoechst33258染色觀察凋亡細胞;流式細胞儀檢測PDGFR-αASODN對RPE細胞周期的影響

3、。4.RT-PCR檢測不同質量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用的RPE細胞后PDGFR-αmRNA表達的變化。
　　結果: 1. PDGFR-αASODN處理RPE細胞后,細胞分裂相變少,部分細胞變圓,隨著濃度的增加,部分細胞出現漂浮及壞死的現象。PDGFR-αASODN能抑制RPE的增殖,隨著作用時間的延長和濃度的增加抑制作用越明顯,表現為濃度與時間依賴性(P<0.01)。2. PDGFR-αA

4、SODN能誘導細胞的凋亡,(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN處理RPE細胞48h后,凋亡率分別為:(10.9±1.7)％、(38.5±1.4)%、(61.6±2.3)%。與對照組比較,各實驗組凋亡率明顯增加(P<0.01),各實驗組兩兩比較差異顯著(P<0.01)。3.流式細胞術顯示:(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN作用RPE細胞后,停滯在G1期細胞百分率分別為:(34.8±1.4)

5、%、(56.3±2.3)%、(64.4±3.2)%。與對照組比較,各實驗組G1細胞百分率明顯增加(P<0.01),各實驗組兩兩比較差異顯著(P<0.01),呈濃度依賴性。4.(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN處理RPE細胞48h后,PDGFR-αmRNA的表達呈下降趨勢。
　　結論: 1. PDGFR-αASODN能抑制RPE細胞的增殖,并表現為濃度和時間依賴性;PDGFR-αASODN能誘導RPE細胞的

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