Survivin反義寡核苷酸對大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6凋亡的影響.pdf

1、目的：通過survivin反義寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞株，研究其對HSC-T6細(xì)胞株凋亡的影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組、ASODN組(400nmol/L、800nmol/L、1000nmol/L)。脂質(zhì)體介導(dǎo)survivin寡核苷酸轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞24小時(shí)后,倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。Surviv

2、in寡核苷酸轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞48小時(shí)后，通過RT-PCR、western-blotting檢測survivin基因表達(dá)的改變,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變，PI單染流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，于倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：ODN各濃度組細(xì)胞內(nèi)均可見到清晰的綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率均達(dá)到80％；轉(zhuǎn)染作用48小時(shí)后,RT-PCR及werstern-blot結(jié)果顯示：與空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSOD

3、N組比較，ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達(dá)量均低于各對照組（p<0.01）；ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達(dá)量組間比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)ASODN各濃度組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象；PI單染流式細(xì)胞儀檢測顯示：與空白組、脂質(zhì)體、1000nmol/LSODN組比較，ASODN各