STAT3反義寡核苷酸聯(lián)合放療對喉癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期影響的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用STAT3反義寡核苷酸技術(shù)轉(zhuǎn)染人喉癌Hep-2細(xì)胞系，研究STAT3反義寡核苷酸聯(lián)合放療對喉癌Hep-2細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期及對STAT3、p-STAT3蛋白表達(dá)的影響，探討STAT3信號通路在降低喉癌放療抵抗和增強(qiáng)其對γ射線放療劑量敏感性的可能性。 方法： 體外培養(yǎng)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞株，取對數(shù)生長期細(xì)胞，利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000包裹STAT3SODN和STAT3ASODN來轉(zhuǎn)

2、染喉癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞。分為未放療組和放療組，放療組給予60Coγ射線(5Gy)照射。未放療組據(jù)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的不同分為反義組、正義組、空白對照組；同理，放療組分為反義+放療組、正義+放療組及放療對照組(單純放療組)。轉(zhuǎn)染物濃度均為200nmol/L。MTT法檢測細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率、細(xì)胞周期變化情況及STAT3、p-STAT3蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.熒光倒置顯微鏡下觀察不同處理?xiàng)l件下Hep-2細(xì)胞形

3、態(tài)的改變空白對照組Hep-2細(xì)胞形態(tài)完整，貼壁生長良好；STAT3ASODN轉(zhuǎn)染后的Hep-2細(xì)胞部分表現(xiàn)為體積變小，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞皺縮；而聯(lián)合放療處理后的Hep-2細(xì)胞的變化較前者更加明顯。 2.不同濃度STAT3寡核苷酸聯(lián)合放療后Hep-2細(xì)胞增殖抑制情況反義組的細(xì)胞生存率與正義組及空白對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而正義組與空白對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。反義+放療組與正義+放療組及單純放療組

4、相比均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而正義+放療與單純放療對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 3.STAT3寡核苷酸聯(lián)合放療后Hep-2細(xì)胞凋亡情況流式細(xì)胞術(shù)檢測反義+放療組、正義+放療組、單純放療組、反義組、正義組、空白對照組細(xì)胞凋亡率的百分?jǐn)?shù)分別為31.16±0.99、10.09±0.91、9.34±1.51、20.10±1.12、6.01±1.65、4.85±1.47；結(jié)果表明反義+放療組細(xì)胞凋亡率與反義組、正義

5、+放療組、單純放療組相比均明顯提高，統(tǒng)計學(xué)上均有顯著性差異(P＜0.01)，而正義+放療組和單純放療組相比，無顯著性差異(P＞0.05)。 4.STAT3寡核苷酸聯(lián)合放療后Hep-2細(xì)胞周期的變化情況流式檢測結(jié)果示，反義+放療組的G0/G1期細(xì)胞比例明顯提高，S期細(xì)胞比例明顯下降，較正義+放療組及單純放療組均有顯著性差異(P＜0.01)；而正義+放療組和單純放療組相比，無顯著性差異(P＞0.05)。反義+放療組的增殖指數(shù)(PI)

6、與正義+放療組及單純放療組相比明顯下降(P＜0.01)；反義+放療組的S期細(xì)胞分?jǐn)?shù)(SPF)與正義+放療組及單純放療組相比明顯增加(P＜0.01)；而正義+放療組和單純放療組相比，PI值與SPF均無顯著性差異(P＞0.05)。 5.STAT3ASODN聯(lián)合放療后對Hep-2細(xì)胞STAT3蛋白及p-STAT3蛋白表達(dá)的影響反義+放療組STAT3及p-STAT3蛋白的表達(dá)量與正義+放療組、反義組及單純放療組相比，均明顯受到抑制作用(

7、P＜0.01)；而正義+放療組與單純放療組之間相比無明顯差異(P＞0.05)，但與空白對照組仍有顯著性差異(P＜0.05)。 6.STAT3蛋白相對表達(dá)量(FI)與細(xì)胞凋亡率(AR)、細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(SF)及細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)的相關(guān)性分析經(jīng)Pearson相關(guān)分析，STAT3的相對蛋白含量(FI)與細(xì)胞凋亡率(AR)成負(fù)相關(guān)(r=-0.9996，P＜0.01)；STAT3的相對蛋白含量(FI)與細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(SF)成正相關(guān)(r=0