microRNAs在卵巢癌細(xì)胞獲得耐藥表型中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：目前針對(duì)卵巢癌耐藥機(jī)制的研究以細(xì)胞學(xué)體外實(shí)驗(yàn)為主，更加接近臨床真實(shí)性的動(dòng)物體內(nèi)模型還需要不斷的完善和改進(jìn)。本文首先建立了三代裸鼠體內(nèi)獲得性順鉑耐藥的動(dòng)物模型，并篩選在動(dòng)物體內(nèi)獲得耐藥過程中發(fā)生變化的micoRNAs 及基因。MicroRNA（miRNAs）是一類廣泛參與腫瘤發(fā)生發(fā)展且和腫瘤化療耐藥密切相關(guān)的小RNAs。本課題同時(shí)對(duì)miR-125b在卵巢癌順鉑化療耐藥中的作用及其分子機(jī)制做了初步的研究和探討。
　　 材料與方

2、法：選用人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株進(jìn)行BALB/C 裸鼠皮下成瘤，并在順鉑的化療壓力下，對(duì)皮下瘤進(jìn)行連續(xù)的體內(nèi)傳代移植，取第三代裸鼠腫瘤組織細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，利用3D 培養(yǎng)球體形成實(shí)驗(yàn)，CCK-8 法細(xì)胞增殖及藥物敏感性實(shí)驗(yàn)等方法對(duì)該體內(nèi)耐藥模型進(jìn)行驗(yàn)證。運(yùn)用miRNA 及全基因組表達(dá)譜芯片篩選可能參與體內(nèi)獲得性耐藥的miRNAs 及基因。并同時(shí)運(yùn)用real time PCR的方法驗(yàn)證在兩種卵巢癌順鉑耐藥配對(duì)細(xì)胞OV2008（順鉑敏感）和

3、C13*中（順鉑耐藥）miR-125b的表達(dá)差異。運(yùn)用cck-8 法和流式細(xì)胞術(shù)對(duì)miR-125b和下游靶基因Bak1在順鉑敏感性中的作用進(jìn)行功能性研究。利用real time PCR，western blotting和熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)的方法對(duì)miR-125b的預(yù)測(cè)靶基因Bak1 進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：相對(duì)于其親本株SKOV3細(xì)胞，三代裸鼠腫瘤組織原代培養(yǎng)細(xì)胞SK-G3細(xì)胞球體形成能力及增殖能力增強(qiáng)，且對(duì)順鉑的耐藥性增加。

4、三代鼠腫瘤組織和一代對(duì)照組腫瘤組織相比，miRNA 及全基因組表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示了存在的差異表達(dá)的miRNAs和基因。另一方面，相對(duì)于OV2008細(xì)胞，miR-125b在C13*細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。我們發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞中上調(diào)的miR-125b 顯著抑制了順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。并且Bak1是miR-125b的一個(gè)確鑿的靶基因，下調(diào)Bak1的表達(dá)抑制了順鉑誘導(dǎo)的凋亡，導(dǎo)致了卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥性的增加。
　　 討論：我們的研究通過建立三