IGF-1R抗體抑制Herceptin耐藥卵巢癌細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、背景：卵巢惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，死亡率位列各類婦科腫瘤的首位。手術(shù)聯(lián)合化療能抑制腫瘤發(fā)展，但是復(fù)發(fā)率高。特異性抗體靶向治療已經(jīng)成為卵巢癌臨床治療的研究熱點(diǎn)，先后有多種抗體進(jìn)入臨床研究，能夠抑制疾病進(jìn)展，具有良好的應(yīng)用前景。但是，抗體耐藥現(xiàn)象明顯影響了疾病預(yù)后。因此，探討卵巢癌抗體耐藥的分子機(jī)制、尋找有效的干預(yù)策略具有重要意義。在前期工作中，我們利用抗HER2抗體曲妥珠長(zhǎng)期處理敏感細(xì)胞系SKOV3，篩選獲得一株抗體耐藥

2、的細(xì)胞株SKOV3-T?；蛐酒治鼋Y(jié)果顯示，SKOV3-T細(xì)胞中HER2表達(dá)水平降低，而IGF-1R表達(dá)顯著上調(diào)，提示耐藥細(xì)胞發(fā)生了HER2表位逃逸，而IGF-1R信號(hào)通路的激活可能與抗體耐藥相關(guān)。
　　目的：確定IGF-1R在抗體耐藥細(xì)胞系中的生物學(xué)功能，并嘗試?yán)每笽GF-1R特異性抗體逆轉(zhuǎn)耐藥，探索在誘導(dǎo)耐藥的過程中細(xì)胞發(fā)生適應(yīng)性改變的內(nèi)在機(jī)制。
　　方法：利用流式細(xì)胞術(shù)、免疫印跡、細(xì)胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤等方法

3、，比較SKOV3和SKOV3-T細(xì)胞的生物學(xué)活性差異。利用真核轉(zhuǎn)染技術(shù)在 SKOV3中轉(zhuǎn)入 IGF-1R全長(zhǎng)質(zhì)粒提高 IGF-1R表達(dá)水平，同時(shí)在 SKOV3-T中轉(zhuǎn)入 IGF-1R-siRNA慢病毒下調(diào)IGF-1R的表達(dá)，借助克隆形成、細(xì)胞增殖、體內(nèi)成瘤、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)等實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證IGF-1R在抗HER2抗體耐藥中潛在作用。針對(duì)IGF-1R篩選獲得了一種人源單克隆抗體LMAb1，借助細(xì)胞增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法探討抗

4、IGF-1R抗體對(duì)HER2耐藥的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)；進(jìn)一步，我們還通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定并分選腫瘤干樣細(xì)胞，利用細(xì)胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)等指標(biāo)，初步探索耐藥發(fā)生過程中腫瘤干細(xì)胞適應(yīng)性改變的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：HER2抗體耐藥細(xì)胞SKOV3-T的增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力均明顯強(qiáng)于敏感細(xì)胞SKOV3；在敏感細(xì)胞中過表達(dá)IGF-1R使得細(xì)胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯增強(qiáng)，細(xì)胞周期S期延長(zhǎng)，而在耐藥細(xì)胞中轉(zhuǎn)入IGF-

5、1R-siRNA慢病毒，降低IGF-1R表達(dá)水平，可以引起細(xì)胞增殖延緩、克隆形成和體內(nèi)成瘤能力減弱，表明IGF-1R在耐藥細(xì)胞系中具有重要的生物學(xué)作用，與耐藥細(xì)胞的增殖和成瘤能力密切相關(guān)；進(jìn)一步，我們制備了IGF-1R抗體LMAb1，實(shí)驗(yàn)表明，LMAb1能夠特異性的抑制SKOV3-T細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移和體內(nèi)成瘤，提高荷瘤小鼠的生存率。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)結(jié)果顯示，抗IGF-1R抗體能夠抑制IGF-1R活化，阻斷下游MAPK、AKT信號(hào)通路，

6、部分逆轉(zhuǎn)曲妥珠耐藥；同時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示，抗體耐藥細(xì)胞系中干樣細(xì)胞群比例明顯升高，分選獲得的干樣細(xì)胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯強(qiáng)于非干樣細(xì)胞，提示在耐藥誘導(dǎo)過程中普通腫瘤細(xì)胞發(fā)生了干細(xì)胞化轉(zhuǎn)變。
　　結(jié)論：IGF-1R分子在卵巢癌抗 HER2抗體耐藥中發(fā)揮重要作用，介導(dǎo)耐藥細(xì)胞SKOV3-T的過度增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤等生物學(xué)活性；利用抗 IGF-1R抗體LMAb1特異性阻斷IGF-1R信號(hào)，能夠顯著抑制耐藥