MPPa光動(dòng)力作用對耐藥卵巢癌細(xì)胞滅活的研究.pdf

1、背景：卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中是導(dǎo)致女性死亡的主要原因。目前國際公認(rèn)的卵巢癌治療方法為腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合基于鉑為一線化療藥的化學(xué)療法。因此，化療在卵巢癌的治療中就起著至關(guān)重要的作用。然而，化學(xué)耐藥的出現(xiàn)制約了化療的發(fā)展，使得化療在臨床治療卵巢癌的療效不盡人意。大量研究表明光動(dòng)力學(xué)療法在治療卵巢癌和其他婦科疾病中具有巨大的潛力。但是，光動(dòng)力學(xué)療法能否滅活耐藥卵巢癌還有待闡明。本研究旨在利用LED新型光源介導(dǎo)光動(dòng)

2、力作用探討其對人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株COC1/DDP細(xì)胞的滅活作用。 材料與方法：采用流式細(xì)胞儀檢測COC1/DDP細(xì)胞內(nèi)MPPa的熒光強(qiáng)度從而了解MPPa的吸收規(guī)律；采用倒置顯微鏡觀察和MTT比色法檢測LED活化MPPa光動(dòng)力作用后COC1/DDP細(xì)胞的生長情況；同時(shí)利用測溫儀對實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞溶液的溫度進(jìn)行監(jiān)測，以了解細(xì)胞溶液的溫度變化情況；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測和Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色法觀察LED活化MPPa介導(dǎo)的光

3、動(dòng)力作用對COC1/DDP細(xì)胞凋亡的影響；通過透射電鏡觀察光動(dòng)力作用后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化情況；利用激光掃描聚焦顯微鏡和細(xì)胞器探針染色法觀察MPPa的亞細(xì)胞定位；最后通過Rhodamine123染色法了解細(xì)胞線粒體膜電位變化情況。 結(jié)果：COC1/DDP細(xì)胞內(nèi)MPPa平均熒光強(qiáng)度值隨著孵育時(shí)間逐漸增大，18小時(shí)左右達(dá)到最大值，后漸趨平臺期；LED活化MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力作用顯著抑制了COC1/DDP細(xì)胞的生長，在一定MPPa濃度和

4、一定LED光能密度條件下，細(xì)胞生長抑制作用呈濃度光密度劑量依賴關(guān)系；倒置顯微鏡下觀察到MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力組細(xì)胞數(shù)量較其他對照組明顯減少，細(xì)胞固縮；單純MPPa對細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性作用，而單純的LED照射結(jié)果顯示有促進(jìn)細(xì)胞增殖作用；實(shí)驗(yàn)中溫度變化監(jiān)測顯示溫度變化隨LED光照時(shí)間有升高，但是增高不顯著，室溫(25℃)條件下最高達(dá)29℃；Hoechst33258細(xì)胞核染色示LED(1J/cm2)活化MPPa(2μM)介導(dǎo)的光動(dòng)力組出現(xiàn)核凝聚、

5、凋亡小體；同時(shí)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn)MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力組，在光動(dòng)力作用6小時(shí)后細(xì)胞凋亡率達(dá)16.71％；透射電鏡觀察到MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力組，在光動(dòng)力作用6小時(shí)后細(xì)胞出現(xiàn)壞死和許多凋亡小體；亞細(xì)胞定位顯示MPPa在COC1/DDP細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體和線粒體中有濃聚，而在溶酶體中有部分聚集；最后Rhodamine123染色對COC1/DDP細(xì)胞線粒體膜電位檢測顯示MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力組，在光動(dòng)力作用6小時(shí)后細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位明