自噬對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥及失巢凋亡抵抗的調(diào)控作用.pdf

1、研究目的與方法:
　　1.采用免疫組化及蛋白印跡法分析自噬效應(yīng)分子在組織及細(xì)胞株中的表達(dá)情況,明確自噬與卵巢癌發(fā)生、耐藥及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　2.采用凋亡和自噬相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù),探索具有雙刃劍效應(yīng)的自噬在卵巢癌細(xì)胞耐藥及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的具體調(diào)控作用,為卵巢癌細(xì)胞的耐藥轉(zhuǎn)移機(jī)制提供研究新視角;
　　3.構(gòu)建失巢凋亡的模型研究細(xì)胞間(ECM)信號(hào)通路在調(diào)控細(xì)胞自噬,進(jìn)而導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞失巢凋亡抵抗中的作用,為開發(fā)卵巢靶向治療的

2、新方法提供理論依據(jù)。
　　研究結(jié)果
　　1.卵巢癌化療敏感臨床標(biāo)本與耐藥標(biāo)本相比,PP2Ac的表達(dá)明顯增高,而LC3的表達(dá)明顯降低,兩者之間存在相關(guān)性。
　　2.在卵巢癌耐藥細(xì)胞中,自噬的表達(dá)水平明顯增高,而且有明顯的CDDP濃度依賴性,而且3-MA或者siRNA抑制自噬表達(dá)可以增加細(xì)胞對(duì)CDDP藥物的敏感性。
　　3.PP2Ac在卵巢耐藥細(xì)胞中的表達(dá)降低。PP2Ac對(duì)LC3的表達(dá)有明顯的負(fù)調(diào)控作用。通過PP2A

3、c質(zhì)粒過表達(dá)或者小劑量FTY720增加PP2A活性,CDDP誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞自噬明顯降低,增加了細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性。而干擾PP2Ac可以增強(qiáng)耐藥細(xì)胞自噬表達(dá),增強(qiáng)其對(duì)CDDP藥物的耐受性。
　　4.卵巢癌敏感和耐藥細(xì)胞株裸鼠原位成瘤模型顯示:鉑類耐藥細(xì)胞成瘤其自噬表達(dá)明顯高于敏感細(xì)胞成瘤。
　　5.卵巢癌上皮細(xì)胞模擬失巢凋亡的懸浮培養(yǎng)、Matrigel鋪膠培養(yǎng)、常規(guī)培養(yǎng)中,失巢凋亡培養(yǎng)細(xì)胞自噬表達(dá)明顯增強(qiáng),其次為鋪膠培養(yǎng)。而且整

4、合素表達(dá)在失巢凋亡中明顯降低。
　　研究結(jié)論
　　本課題主要針對(duì)臨床上出現(xiàn)的大量卵巢癌化療耐藥,以期探尋新的靶向治療克服耐藥為目的。通過臨床病理標(biāo)本、細(xì)胞分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型研究自噬在卵巢癌耐藥及失巢凋亡抵抗中所起到的重要作用及其調(diào)控機(jī)制。
　　1.在卵巢癌耐藥細(xì)胞中自噬起到保護(hù)性作用,是造成腫瘤耐藥的重要原因之一,抑制自噬可以促進(jìn)耐藥細(xì)胞對(duì)腫瘤的敏感性。
　　2.PP2Ac負(fù)調(diào)控卵巢癌耐藥細(xì)胞自噬作用,小劑