miR-152在卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　 microRNAs(miRNAs)是一長度約為18～25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。miRNA調(diào)節(jié)多種生物過程,不僅在生理情況下而且在病理情況下,如細(xì)胞的增殖、死亡、凋亡、分化以及基因的穩(wěn)定性等,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多miRNA直接與癌癥相關(guān),如肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌以及白血病等。miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,發(fā)揮著相當(dāng)于癌基因或抑癌基因的作用。
　　 卵巢惡性腫瘤是一種常

2、見的女性生殖器腫瘤,其死亡率占據(jù)婦科腫瘤的第一位。目前發(fā)現(xiàn)很多miRNAs在卵巢癌中異常表達(dá),miR-140,miR-145和miR-21是發(fā)現(xiàn)比較早的幾個(gè)在卵巢癌中異常表達(dá)的miRNAs,而且進(jìn)一步證實(shí),它們?cè)诼殉舶┑陌l(fā)展過程中也發(fā)揮了重要的作用。miR-210在卵巢癌中異常表達(dá),調(diào)節(jié)E2F3蛋白水平,在卵巢癌發(fā)病中起關(guān)鍵作用。WymanSK等發(fā)現(xiàn)miR-152在卵巢癌組織中表達(dá)下調(diào)。越來越多的研究表明,miKNA與卵巢癌有著非常密切

3、的關(guān)系。隨著研究的不斷深入,miRNA在卵巢癌的基因診斷和治療中將發(fā)揮重要的作用。
　　 在本研究中,我們參考國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)及前期關(guān)于卵巢癌的miRNA表達(dá)譜的研究,初步確定miR-152為我們的研究重點(diǎn)。利用real-time PCR技術(shù)檢測了卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3相對(duì)于正常卵巢組織中miR-152的表達(dá),通過使卵巢癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-152,初步探索其在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法：
　　 一

4、、miR-152在正常卵巢組織及卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)
　　 我們選擇卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3及17例正常卵巢組織手術(shù)標(biāo)本,經(jīng)提取RNA,加尾,抽提純化,反轉(zhuǎn)錄后得到cDNA模板,運(yùn)用real-time PCR檢測miR-152相對(duì)于正常卵巢組織的表達(dá)量,如果相對(duì)表達(dá)量小于1,則被認(rèn)為是低表達(dá)。反之,被認(rèn)為是高表達(dá)。
　　 二、miR-152對(duì)細(xì)胞增殖的影響
　　 向卵巢癌細(xì)胞系中(OVCAR3)轉(zhuǎn)染miR-152

5、 mimics,使miR-152在卵巢癌細(xì)胞中過表達(dá),通過MTT及細(xì)胞計(jì)數(shù)生長實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染miR-152 mimics后對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 一、miR-152在卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)
　　 real-time PCR結(jié)果顯示,miR-152在人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3中較正常卵巢組織呈低表達(dá)(p＜0.01)。
　　 二、miR-152對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響
　　 OVCAR3在轉(zhuǎn)染

6、了miR-152 mimics后,經(jīng)real-time PCR檢測驗(yàn)證,轉(zhuǎn)染了miR-152 mimics的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中,miR-152的表達(dá)水平較對(duì)照組有所提高。應(yīng)用MTT法繪制的生長曲線及細(xì)胞計(jì)數(shù)生長曲線表明,對(duì)于OVCAR3細(xì)胞系,轉(zhuǎn)染了miR-152mimics實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞從48小時(shí)開始其增殖速率明顯低于陰性對(duì)照及空白對(duì)照組(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3中,miR-152的表