人卵巢癌細胞系OVCAR3的腫瘤干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、目的: 腫瘤干細胞是存在于腫瘤中的一小部分細胞，具有無限增殖和自我更新的能力，有研究表明，很多腫瘤組織中存在具有干細胞特性的少量的細胞群，是腫瘤發(fā)生、復發(fā)和轉(zhuǎn)移的原因。但對于卵巢癌的腫瘤干細胞的研究報道甚少。本研究通過無血清懸浮培養(yǎng)人卵巢癌細胞系OVCAR3，獲得具有非錨著依賴能力的腫瘤干細胞球，觀察其生物學特性及形態(tài)學的變化，并采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)及細胞免疫化學的方法鑒定腫瘤干細胞標志ABCG2在貼壁

2、細胞及腫瘤干細胞球中的表達差異。 方法： 用無血清懸浮培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)腫瘤干細胞，并且在缺乏B27(無血清添加劑)、未使用超低吸附的培養(yǎng)皿及用甲基纖維素懸浮培養(yǎng)等不同的培養(yǎng)條件下觀察細胞的形態(tài)及生長情況。通過卵巢癌細胞系OVCAR3的單細胞培養(yǎng)、腫瘤干細胞球形成分析及連續(xù)傳代的方法鑒定腫瘤干細胞的特性，用RT-PCR及細胞免疫化學的方法鑒定腫瘤干細胞標志ABCG2的mRNA和蛋白表達情況。統(tǒng)計學方法：應用SPSS13.

3、0軟件進行分析，細胞免疫化學的結(jié)果應用t檢驗進行分析，所得數(shù)據(jù)以-x±s表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 在卵巢癌細胞系OVCAR3中只有少數(shù)細胞(0.9％)能在無血清懸浮培養(yǎng)的條件下存活，形成具有非錨著依賴生長的腫瘤干細胞球，并保持連續(xù)增殖分裂的能力。通過不同的培養(yǎng)方法證實，B27和超低吸附的培養(yǎng)皿對于得到腫瘤干細胞球是非常重要的條件，而在甲基纖維素中培養(yǎng)獲得的細胞團能懸浮生長，但小而不規(guī)則。

4、單細胞培養(yǎng)實驗證實腫瘤干細胞球是由單細胞增殖而來，而不是細胞聚集；腫瘤干細胞球中只有少數(shù)細胞具有再形成細胞球的能力，其比例隨傳代次數(shù)增多而增多；細胞球來源的細胞具有自我更新的能力，并能連續(xù)增殖。腫瘤干細胞球的干細胞標志ABCG2mRNA及蛋白的表達高于在有血清的培養(yǎng)條件下貼壁生長的細胞。 結(jié)論： 在卵巢癌細胞系OVCAR3中存在一小群具有自我更新和連續(xù)增殖能力的細胞，其能在無血清的條件下形成細胞球、懸浮生長并連續(xù)傳代，高