人卵巢癌干細胞的分離、鑒定及其特異性microRNA的篩選.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號：B2008071人卵巢癌干細胞的分離、鑒定及其特異性microRNA的篩選IsolationandidentificationofcancerstemcellSfromhumanovariancarcinomaandscreeningofitsspecificmicroRNAs所院：姓名：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：北京協(xié)和醫(yī)院駱黎靜沈鏗教授楊佳欣教授曹冬焱副教授學(xué)科專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)

2、研究方向：婦科腫瘤完成日期：2011年5月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文摘要研究背景腫瘤干細胞是腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的根源。對卵巢癌干細胞的鑒定和分選將有助于解決卵巢癌耐藥和復(fù)發(fā)問題。miRNA突變或異位表達與多種人類癌癥有關(guān)，許多rrdcroRNA參與了干細胞的自我更新與分化。尋找卵巢癌干細胞特異性的microRNA將會為消滅卵巢癌干細胞提供一個絕佳的機會。本研究的目的是確定卵巢癌干細胞的候選標(biāo)記物并對其特異性miRNA進行初步篩選。研究方法1

3、將14例人原代卵巢漿液性腺癌組織或腹水的腫瘤細胞接種于免疫缺陷小鼠的體內(nèi)從而建立一種卵巢癌移植瘤模型。利用這種移植瘤模型來分析卵巢癌細胞中不同細胞群體的腫瘤形成能力。用流式細胞術(shù)來鑒定和分選移植瘤中CDll7Lineage一細胞并研究這群細胞的生物學(xué)特性。選取25例晚期卵巢漿液性腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本進行CDll7免疫組化染色，分析CDl17的表達與化療結(jié)局之間的關(guān)系。2用Hoechst33342染色法檢測了6個卵巢癌細胞系(H0891

4、0，0VCAR3，3A0，ES一2，A2780和SK0V3)和3例卵巢癌裸鼠移植瘤中的側(cè)群(SP)表型。運用流式細胞術(shù)分別從H08910，0VCAR一3，3A0以及1例移植瘤中分選SP和NSP(非側(cè)群)細胞。我們對比了SP和NSP細胞體內(nèi)外自我更新、分化和腫瘤形成的能力。運用realtimePCR方法檢測了SP和NSP細胞中干性分子(0ct4，Klf4，Nanog)和ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運蛋白(ABCG2，ABCBl，ABCC2)m

5、RNA的表達。以藥敏試驗來檢測SP和NSP細胞對紫杉醇、順鉑、米托葸醌和多柔比星的敏感性。3利用基因芯片技術(shù)，將H08910SP細胞microRNA與NSP細胞microRNA芯片雜交，找出差異表達的microRNA，通過特定基因反向篩選，找出調(diào)控干細胞自我更新和耐藥的microRNA。研究結(jié)果：1移植瘤中CDl17Lineage。細胞的比例不足2％，在免疫缺陷小鼠體內(nèi)只需要接種103個CDl17Lineage‘細胞即可成瘤，其成瘤能力

6、是CDl17Lineage。細胞的100倍。CDll7Lineage。細胞在裸鼠體內(nèi)能夠連續(xù)成瘤，其形成的腫瘤呈現(xiàn)出與其親本腫瘤相似的細胞異質(zhì)性，從而證明這群細胞具有干細胞的兩大特性，即自我更新和分化。對臨床樣本CDl17的免疫組化分析結(jié)果顯示，CDl17的表達率為40％(10／25例)，CDl17的表達與化療耐藥密切相關(guān)(P=0027)。2在卵巢癌細胞系HO8910、OVCAR3、3AO以及3例移植瘤中能檢測到不同比例的SP細胞，但在