結(jié)直腸癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)直腸癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定姓名：胡祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：程勇20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第二部分LOVo細(xì)胞系中結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定目的：從LOVO細(xì)胞系中分離、鑒定具有CD44／EPCAMMg“特異表型的結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞，觀察其生物學(xué)行為，證實(shí)細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的存在。方法：從普通血清培養(yǎng)的LOVO細(xì)胞系中，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分離

2、具有CD44／EPCAMh曲g表型的結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞，并接種于添加生長因子的無血清培養(yǎng)基中，觀察其生長增殖過程，繼而誘導(dǎo)分化；MTT法，流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞克隆增殖能力，凋亡及細(xì)胞周期分布；最后接種裸鼠，比較細(xì)胞的成瘤率，并用免疫熒光技術(shù)觀察次代腫瘤CD44／EPCAM的表達(dá)。結(jié)果：LOVO細(xì)胞系中有174％的CD44／EPCAMMgh表型細(xì)胞，并能在添加生長因子的無血清培養(yǎng)基中呈細(xì)胞球樣生長，連續(xù)傳代，在血清的誘導(dǎo)下分化呈貼壁生長

3、與未分選LOVO細(xì)胞無差別；CD44／EPCAMh劬g細(xì)胞組(PG)較EPCAMlow細(xì)胞組(NG)及未分選細(xì)胞組(CG)更強(qiáng)的增殖能力，細(xì)胞周期多集中在G0／G1期；以500個(gè)CD44／EPCAMMg“細(xì)胞接種裸鼠成瘤率為90％(9／10)，而104個(gè)EPCAMlow細(xì)胞成瘤率為0(0／10)；次代腫瘤細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察仍有少量細(xì)胞表達(dá)CD44／EPCAM。結(jié)論：LOVO細(xì)胞株中存在CD44／EPCAMg“表型的結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞，