ODAM對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖功能的影響.pdf

1、目的:通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及純化蛋白等方法,研究ODAM對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT8增殖功能的影響,為深入了解結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:(1)采用實(shí)時(shí)定量PCR分別檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT8、COLO205、HCT116和SW480中ODAM的mRNA表達(dá)水平;(2)利用小RNA干擾片段,瞬時(shí)干擾結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT8后,進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn);(3)構(gòu)建ODAM干擾及過表達(dá)慢病毒載體,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞,分別

2、進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn);(4)構(gòu)建V152-ODAM重組質(zhì)粒,采用層析法獲取ODAM重組蛋白純化液,設(shè)置濃度梯度進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:(1)ODAM在結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT8中表達(dá)較高,在COLO205、HCT116和SW480中表達(dá)較低;(2)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染干擾成功后,HCT8細(xì)胞的增殖能力增加;(3)穩(wěn)定干擾成功后,HCT8細(xì)胞的增殖能力增加;穩(wěn)定過表達(dá)成功后,HCT8細(xì)胞的增殖能力降低;(4)ODAM重組蛋白純化成功后,CCK