結(jié)直腸癌HCT116細(xì)胞株干樣細(xì)胞的篩選與鑒定.pdf

1、目的:
　　本課題通過無血清有限稀釋法，從人結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116中篩選獲得結(jié)直腸癌干細(xì)胞樣克隆球，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測克隆球的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44的表達(dá)、細(xì)胞周期分布和軟瓊脂集落形成實驗，鑒定篩選出的克隆球細(xì)胞為結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞;通過結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞耐藥性實驗，證明篩選出的結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞較HCT116細(xì)胞具有更強的耐藥性。
　　方法:
　　1.運用有限稀釋無血清培養(yǎng)法，從結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT1

2、16中篩選腫瘤干細(xì)胞樣克隆球，并擴大培養(yǎng)建立腫瘤干細(xì)胞克隆亞系。
　　2.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44和檢測細(xì)胞周期分布情況，以及軟瓊脂集落形成實驗，鑒定篩選出的克隆球細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞特性。
　　3.采用CCK-8法研究氟尿嘧啶和槐耳清膏分別對結(jié)腸癌細(xì)胞生長增殖的抑制作用，比較藥物干預(yù)后的人結(jié)腸癌干樣細(xì)胞和HCT116細(xì)胞表現(xiàn)出的耐藥性差異。
　　結(jié)果:
　　1、通過無血清有限稀釋法篩選

3、出腫瘤干細(xì)胞樣克隆球14個，細(xì)胞株克隆球形成率為28.6％;該群克隆球細(xì)胞表現(xiàn)為:較HCT116細(xì)胞具有更高的成球率(43.2％)，增殖快，可不斷傳代，予含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可重新分化，表現(xiàn)出腫瘤干細(xì)胞不斷增殖、自我更新和再分化的特點。
　　2、流式細(xì)胞術(shù)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物檢測，HCT116中有87.97％的細(xì)胞表達(dá)CD133+CD44+，克隆球細(xì)胞中93.87％的細(xì)胞表達(dá)CD133+CD44+。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期，克隆球中77.1

4、8％的細(xì)胞處于G1期，HCT116中49.00％的細(xì)胞處于G1期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。軟瓊脂集落形成實驗中，克隆球1和2的集落形成率分別為51.97％和39.54％，HCT116細(xì)胞的集落形成率為5.67％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、腫瘤干樣細(xì)胞耐藥性實驗中，隨著用藥濃度的升高，氟尿嘧啶和槐耳清膏對腸癌細(xì)胞的生長增殖抑制作用均逐漸增強;相同的藥物濃度下，腫瘤干樣細(xì)胞生長增殖被抑制的程度較原株細(xì)胞低。
　　結(jié)論:
　　1