結(jié)直腸癌HCT116細(xì)胞株干樣細(xì)胞的篩選與鑒定.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  本課題通過(guò)無(wú)血清有限稀釋法,從人結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116中篩選獲得結(jié)直腸癌干細(xì)胞樣克隆球,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)克隆球的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44的表達(dá)、細(xì)胞周期分布和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn),鑒定篩選出的克隆球細(xì)胞為結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞;通過(guò)結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞耐藥性實(shí)驗(yàn),證明篩選出的結(jié)直腸腫瘤干樣細(xì)胞較HCT116細(xì)胞具有更強(qiáng)的耐藥性。
  方法:
  1.運(yùn)用有限稀釋無(wú)血清培養(yǎng)法,從結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT1

2、16中篩選腫瘤干細(xì)胞樣克隆球,并擴(kuò)大培養(yǎng)建立腫瘤干細(xì)胞克隆亞系。
  2.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44和檢測(cè)細(xì)胞周期分布情況,以及軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn),鑒定篩選出的克隆球細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞特性。
  3.采用CCK-8法研究氟尿嘧啶和槐耳清膏分別對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用,比較藥物干預(yù)后的人結(jié)腸癌干樣細(xì)胞和HCT116細(xì)胞表現(xiàn)出的耐藥性差異。
  結(jié)果:
  1、通過(guò)無(wú)血清有限稀釋法篩選

3、出腫瘤干細(xì)胞樣克隆球14個(gè),細(xì)胞株克隆球形成率為28.6%;該群克隆球細(xì)胞表現(xiàn)為:較HCT116細(xì)胞具有更高的成球率(43.2%),增殖快,可不斷傳代,予含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可重新分化,表現(xiàn)出腫瘤干細(xì)胞不斷增殖、自我更新和再分化的特點(diǎn)。
  2、流式細(xì)胞術(shù)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè),HCT116中有87.97%的細(xì)胞表達(dá)CD133+CD44+,克隆球細(xì)胞中93.87%的細(xì)胞表達(dá)CD133+CD44+。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,克隆球中77.1

4、8%的細(xì)胞處于G1期,HCT116中49.00%的細(xì)胞處于G1期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)中,克隆球1和2的集落形成率分別為51.97%和39.54%,HCT116細(xì)胞的集落形成率為5.67%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  3、腫瘤干樣細(xì)胞耐藥性實(shí)驗(yàn)中,隨著用藥濃度的升高,氟尿嘧啶和槐耳清膏對(duì)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖抑制作用均逐漸增強(qiáng);相同的藥物濃度下,腫瘤干樣細(xì)胞生長(zhǎng)增殖被抑制的程度較原株細(xì)胞低。
  結(jié)論:
  1

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