h-PNAS-4抑制人卵巢癌細(xì)胞系體外增殖的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模篽-PNAS-4是近來發(fā)現(xiàn)的新基因，初步的研究表明，它是一凋亡相關(guān)基因。本實(shí)驗(yàn)旨在研究新基因h-PNAS-4對人卵巢癌細(xì)胞系：順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP、敏感株A2780和細(xì)胞株skov。同時(shí)觀察h-PNAS-4聯(lián)合熱處理時(shí)對上述細(xì)胞系體外增殖的影響。實(shí)驗(yàn)方法：用脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)轉(zhuǎn)染的方法將h-PNAS-4分別導(dǎo)入細(xì)胞株A2780/DDP、A2780和skov-3，同時(shí)導(dǎo)入帶有表達(dá)綠色熒光蛋白

2、(GFP)的h-PNAS-4，通過熒光計(jì)數(shù)確定轉(zhuǎn)染效率；利用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)檢測轉(zhuǎn)染后48小時(shí)h-PNAS-4對人卵巢癌細(xì)胞系體外增殖的抑制作用；瓊脂糖凝膠電泳(DNA LADDER)及HOECHST染色檢測其誘導(dǎo)凋亡的作用；轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，將各細(xì)胞系進(jìn)行熱處理(43℃，2h)，再于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22小時(shí)，采用Weeb系數(shù)判定h.PNAS-4聯(lián)合熱處理對上訴細(xì)胞系體外增殖的作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.脂質(zhì)體Li

3、pofectamine2000能成功的將新基因h-PNAS-4導(dǎo)入人卵巢癌細(xì)胞系。 2.h-PNAS-4能明顯的抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖：在細(xì)胞系A(chǔ)2780/DDP、A2780中其抑制率分別為48.32％、60.48％，與各對照組相比，其P<0.05。 3．h-PNAs-4能顯著的誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞的凋亡：瓊脂糖凝膠電泳(DNA LADDER)顯示DNA呈現(xiàn)階梯狀條帶；HOECHST染色表現(xiàn)出核濃縮、分裂及深染。 4．