P21-BRCA1信號通路與姜黃素抑制鼠轉(zhuǎn)基因卵巢癌細(xì)胞系增殖的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　 卵巢癌是常見的婦科腫瘤,常規(guī)治療為手術(shù)切除輔以鉑類和紫杉醇為基礎(chǔ)的化療,晚期常復(fù)發(fā),發(fā)展為鉑類和紫杉醇的耐藥,是治療失敗的主要原因之一,緊迫需要新的治療策略和靶點(diǎn)。姜黃素具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用,因其抗癌譜廣,毒副作用小,美國國立腫瘤研究所已將其列為第三代腫瘤化學(xué)預(yù)防藥物。
　　 BRCA1是一種抑癌基因,與遺傳性乳腺癌關(guān)系密切,近年來研究表明在散發(fā)性卵巢癌中BRCA1基因突變也較常見,

2、且多種信號通路參與了BRCA1的抗腫瘤作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MTT法和RT-PCR法檢測姜黃素對鼠轉(zhuǎn)基因卵巢癌細(xì)胞系增殖的影響及與BRCA1基因的關(guān)系,并探討是否P21/BRCA1信號通路參與了此過程。
　　 實(shí)驗(yàn)材料與方法：
　　 一、材料
　　 鼠轉(zhuǎn)基因卵巢癌細(xì)胞系T1(P53-/-,C-myc,K-ras)、T2(P53-/-,C-myc,Akt)和TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-m

3、yc)
　　 二、方法
　　 (一)MTT法
　　 檢測姜黃素對鼠轉(zhuǎn)基因卵巢癌細(xì)胞系作用不同濃度(20、40、80μmol/L)和不同時(shí)間(12h、24h、48h)T1、T2、TBR6三種細(xì)胞系增殖抑制情況,并比較T1、T2與TBR6抑制率之間的差異。
　　 (二)RT-PCR法
　　 檢測姜黃素對鼠轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系作用不同濃度,(20、40、80μmol/L)和不同時(shí)間(12h、24h、48h)BR

4、CA1基因和P21基因表達(dá)的情況。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、姜黃素對鼠轉(zhuǎn)基因卵巢癌細(xì)胞系T1(P53-/-,C-myc,K-ras)、T2(P53-/-,C-myc,Akt)、TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-myc)均有明顯抑制作用,且抑制率都隨姜黃素作用時(shí)間和濃度的增加而逐漸增加,但T1,T2的抑制率明顯高于TBR6,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、BRCA1基因正常表達(dá)的T1、

5、T2細(xì)胞系BRCA1mRNA在濃度40μmol/L的姜黃素不同時(shí)間12h、24h、48h作用下BRCA1mRNA表達(dá)逐漸增高,在不同濃度20、40、80μmol/L姜黃素作用24h后BRCA1mRNA表達(dá)也逐漸增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。TBR6的BRCA1 mRNA表達(dá)缺失,說明卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系傳代后基因特性表達(dá)穩(wěn)定。
　　 3、不同濃度姜黃素及不同作用時(shí)間后,T1(P53-/-,C-myc,K-ras),T2(P

6、53-/-,C-myc,Akt),TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-myc)中的P21 mRNA表達(dá)沒有明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、姜黃素對三種鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系均有明顯抑制作用,且隨著作用時(shí)間和濃度的增加抑制率逐漸增加,但有BRCA1基因表達(dá)的細(xì)胞系對姜黃素作用更敏感。
　　 2、姜黃素抑制鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系增殖的作用機(jī)制之一是通過上調(diào)抑癌基因BRCA1的表達(dá),從而抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。<