PADI4基因?qū)Σ煌琾53狀態(tài)的卵巢癌細(xì)胞系生長及轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：
　　探討在卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和SKOV3中PADI4的表達(dá)以及對卵巢癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響，并篩選出與PADI4作用機(jī)制有關(guān)的基因。
　　方法：
　　本研究選用p53基因表達(dá)陽性的卵巢癌細(xì)胞A2780和p53基因表達(dá)陰性的卵巢癌細(xì)胞SKOV3，分別在體外試驗(yàn)中轉(zhuǎn)染PADI4-siRNA，并設(shè)置陰性對照組(NC組)及空白對照組（BC組），采用實(shí)時定量PCR和Western blot檢測兩種卵巢癌

2、細(xì)胞中PADI4 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)，從而確定PADI4-siRNA的沉默效率。采用CCK-8試劑盒、AnnexinV-PE/7-AAD雙染和transwell小室的方法分別檢測轉(zhuǎn)染PADI4-siRNA后卵巢癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲的情況。PCRArray篩選p53信號通路、凋亡和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因中與PADI4作用機(jī)制相關(guān)的基因，并用實(shí)時定量PCR驗(yàn)證PCR Array的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)時定量

3、PCR和Western blot檢測到轉(zhuǎn)染PADI4 siRNA可有效抑制兩種卵巢癌細(xì)胞中PADI4mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)。
　　2.與NC組相比，PADI4-siRNA組中的卵巢癌細(xì)胞A2780和SKOV3的增殖均明顯被抑制(PA2780＜0.05; PSKOV3＜0.001);在PADI4-siRNA組中A2780細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比例明顯增加(P＜0.001)，遷移和侵襲能力明顯減弱(P＜0.001)，而SKOV3細(xì)胞的凋

4、亡、遷移和侵襲情況與陰性對照siRNA組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.在卵巢癌細(xì)胞A2780中，抑制PADI4的表達(dá)后，通過基因芯片驗(yàn)證與p53信號通路、凋亡和轉(zhuǎn)移相關(guān)的227個基因中有13個基因表達(dá)量較NC組上調(diào)或者下調(diào)，在p53信號通路中有2個基因顯著上調(diào)，分別是雌激素受體1(ESR1)和腫瘤壞死因子(TNF)，另外還有4個顯著下調(diào)的基因，分別是Sestrin2(SESN2)、腫瘤蛋白p63(TP63)、糖基化磷酯酰肌醇錨定蛋白

5、(GML)和白介素6(IL6)。在與凋亡相關(guān)的基因中有2個顯著上調(diào)的基因，分別是腫瘤壞死因子受體超級家族9(TNFRSF9)和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)DFFA影響因子α(CIDEA)，另有4個顯著下調(diào)的基因，分別是BCL2-like2(BCL2L2)、BCL2-拮抗因子1(BAK1)、腫瘤壞死因子受體超家族11b(TNFRSF11B)和TNF超家族6(FASLG)。在與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因中有3個顯著上調(diào)的基因，分別為基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP14)、W

6、AS/WASL相互作用蛋白家族1(WIPF1)和胰島素樣生長因子1(IGF1)，另有1個顯著下調(diào)的基因，為整連蛋白β3(ITGB3)。
　　結(jié)論：
　　靶向PADI4的siRNA在體外能有效沉默卵巢癌細(xì)胞A2780和SKOV3中PADI4基因的表達(dá);PADI4的沉默可抑制兩種卵巢癌細(xì)胞A2780（野生型p53）和SKOV3（p53缺失型）增殖，但抑制PADI4表達(dá)僅能在有p53基因表達(dá)時誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡，在p53基因缺失時