轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ基因重組體在卵巢癌細(xì)胞系中作用的探討.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ基因重組體在卵巢癌細(xì)胞系中作用的探討姓名：陳輝申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：孫永玉王澤華20040401華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文第一部分轉(zhuǎn)化生長因子0受體II(TORII)cDNA的克隆摘要:目的為構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長因子a受體II(TORII、基因重組表達(dá)載體克隆T咫IIcDNA。方法以T膽IImRNA全長序列為模板，利用Primer5引物設(shè)計軟件設(shè)計T膽IIoDNA上、下游引

2、物。上游引物序列為5TTAGTCGACATGGGTCGGGGGCTGCTC3，引入SalI限制酶酶切位點下游引物序列為5GCGGCGGTTCGAACTATTTGGTAGTGTTTAGG3’引入HindIII限制酶酶切位點。用異硫氫酸呱CGueanidineisothiocyanate)法從人胚胎肝臟中提取總RNA然后用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)和PCR反應(yīng)提取和擴增T皿IIcDNA。用瓊脂糖凝膠電泳和DNA測序槳定克隆的TORII

3、基因。結(jié)果DNA樣品電泳后在瓊脂糖凝膠上出現(xiàn)了位于兩個Marker條帶1886p和1489bp之間的DNA片斷，測序分析全長為1726bp堿基，與基因庫TOR11mRNA序列配對。結(jié)論從人胚胎肝臟中可以獲得用于基因重組的結(jié)構(gòu)正常的T皿n基因片斷。關(guān)鍵詞:克隆逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng):DNA測序第二部分構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長因子p受體II基因與質(zhì)粒pAdtrackCMV摘要:目的構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒載體pAdtrackCMVTORII重組體。方法采用雙酶切反

4、應(yīng)的方法用HindlII和SalI兩種限制性內(nèi)切酶對轉(zhuǎn)化生長因子a受體II基因(T膽II)和真核表達(dá)質(zhì)粒pAdtrackCM，進(jìn)行酶切。用瓊脂糖1娜勿冰garose酬)電泳的方法回收需要的酶切片斷。采用粘端連接反應(yīng)方法，用T4DNA連接酶重新連數(shù)圣酶切的帶有不同粘性和湍的T膽II與質(zhì)粒pAdttackCMVDNA片斷。結(jié)果用瓊脂糖凝膠電泳分離出酶切片斷，并在含卡那霉素瓊脂平板上鑒定出含重組質(zhì)粒的生長菌落。結(jié)論在克隆目的基因過程中使用帶有