MDM2-p53反饋環(huán)對(duì)卵巢癌細(xì)胞藥敏性的影響及機(jī)制.pdf

1、[目的]:卵巢癌是惡性度最高的婦科腫瘤之一,其病死率居?jì)D科腫瘤之首,嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命安全,其治療以手術(shù)和化療為主,但晚期卵巢癌五年生存率仍低于30％,導(dǎo)致卵巢癌化療失敗的主要原因是卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性.順鉑耐藥與否,患者的平均生存時(shí)間和復(fù)發(fā)率有顯著差別.提高卵巢癌的化療敏感性,降低化療耐藥尤其是對(duì)最常用的化療藥物順鉑的耐藥性是改善臨床預(yù)后的關(guān)鍵,因此,從基因水平尋求新型有效的治療方案是當(dāng)今腫瘤研究的熱點(diǎn).為探討此藥敏

2、性發(fā)生改變的機(jī)理,我們通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)A2780的細(xì)胞周期,A2780-MDM2細(xì)胞在給以順鉑治療后,G<,1>期明顯縮短,而S期明顯延長(zhǎng),從而使己受順鉑損傷的卵巢癌細(xì)胞進(jìn)入S期而導(dǎo)致死亡,因而對(duì)順鉑的敏感性增加.A2780在給予順鉑治療后,出現(xiàn)了明顯的G<,2>期阻滯,這使受到順鉑損傷的細(xì)胞在進(jìn)入關(guān)鍵的M期前修復(fù),因而降低了順鉑對(duì)A2780卵巢癌細(xì)胞的殺傷作用.順鉑發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)理是導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)順鉑-DNA復(fù)合物的形成和通

3、過使DNA鏈內(nèi)和雙鏈之間的纏繞變形而導(dǎo)致?lián)p傷,而這種損傷主要由p53介導(dǎo)的核苷酸切除反應(yīng)(nucleotide excision repair,NER)修復(fù),因此我們利用原子吸收光譜儀測(cè)定DNA中的鉑量以進(jìn)行DNA-順鉑結(jié)合及修復(fù)檢測(cè)、宿主細(xì)胞重激活實(shí)驗(yàn)(HCR)等直接測(cè)試在轉(zhuǎn)染了MDM2的細(xì)胞中,DNA修復(fù)是否降低了.首先我們觀察了A2780-MDM2和A2780-V細(xì)胞DNA的鉑結(jié)合量.在順鉑作用2小時(shí),結(jié)合量相似,即二者的順鉑吸收

4、率相同.然而在隨后的時(shí)間點(diǎn)A2780-MDM2的順鉑-DNA結(jié)合量較A2780-V增加更多,提示A2780-MDM2的DNA切除修復(fù)反應(yīng)失活,順鉑得以與A2780-MDM2細(xì)胞的DNA結(jié)合,因而使細(xì)胞無法進(jìn)行復(fù)制和分裂.由于順鉑導(dǎo)致的DNA損傷會(huì)顯著阻滯RNA多聚酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄過程,因此,編碼了某種酶(氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶)的報(bào)告質(zhì)粒受損傷后,再轉(zhuǎn)染至DNA修復(fù)缺陷的細(xì)胞,則失活而不表達(dá)其攜帶的報(bào)告基因.那么受損傷報(bào)告質(zhì)粒的重激活便成為衡量某

5、一特定細(xì)胞系DNA修復(fù)能力的指標(biāo).在該研究中,我們用被順鉑損傷的pCAT(R)3報(bào)告質(zhì)粒以衡量細(xì)胞對(duì)順鉑導(dǎo)致的DNA損傷的修復(fù)能力.結(jié)果提示,在A2780-MDM2細(xì)胞,對(duì)被順鉑損傷的報(bào)告基因的修復(fù)下降,即其核苷酸切除修復(fù)反應(yīng)下降,因而藥敏性增加.[結(jié)論]:MDM2轉(zhuǎn)染于p53為野生型的A2780細(xì)胞中導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)順鉑的藥敏性增加.但在無p53表達(dá)的SKOV-3組,MDM2對(duì)細(xì)胞的藥敏性沒有影響.我們的結(jié)果說明MDM2-p53反饋環(huán)可以改