MDM2-P53通路在糖尿病心肌病中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病(Diabetic mellitus,DM)最常見的并發(fā)癥之一,是糖尿病患者致殘、致死的重要原因。糖尿病心肌病主要的發(fā)病機(jī)制包括心肌細(xì)胞代謝障礙、微血管病變、心臟自主神經(jīng)病變及胰島素抵抗等導(dǎo)致的一系列病理改變。其主要的病理表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大、心肌肥厚、心肌間質(zhì)纖維化以及心肌細(xì)胞的凋亡等。臨床表現(xiàn)早期為心臟的舒張功能受損,逐漸出現(xiàn)收縮功能障礙,最終可導(dǎo)致心

2、力衰竭。目前研究認(rèn)為MDM2(Murine double-minute2,鼠雙微粒體蛋白2)和可通過一些途徑對(duì)糖尿病心肌病產(chǎn)生影響:如MDM2可以抑制心肌肥厚;p53可以促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡等等。MDM2與p53之間構(gòu)成降解-反式激活循環(huán)通路:MDM2通過使p53泛素化導(dǎo)致p53降解,而p53反式激活因子誘導(dǎo)MDM2,消除反饋循環(huán)。研究MDM2/p53與糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)心肌肥厚、心肌細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,通過干擾兩者之間的反饋

3、循環(huán),使p53蛋白表達(dá)降低,從而使心肌纖維化、心肌肥厚及心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展受到抑制,這可能是糖尿病心肌病很有希望的治療方式。故本實(shí)驗(yàn)以鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔注射建立糖尿病心肌病大鼠模型，探討MDM2/p53通路在糖尿病心肌病中的作用及機(jī)制。方法：1、模型的建立及分組：將25只健康雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Normal control,NC組)10只和糖尿病組(Diabe

4、tes mellitus, DM組)15只。DM組大鼠一次性腹腔注射STZ60mg/kg，NC組大鼠予以等劑量的枸櫞酸緩沖液。所有大鼠均以原飼料繼續(xù)喂養(yǎng)8周。2、心臟采血測(cè)定空腹血糖。3、心臟采血后迅速取出心臟,用等滲鹽水洗凈,濾紙吸干,稱心臟重量,計(jì)算左心室重量指數(shù)。4、HE染色和Masson染色：取左心室游離壁組織,常規(guī)固定,石蠟包埋,觀察心肌細(xì)胞大小及心肌纖維化情況。5、透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的變化。6、TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞

5、凋亡指數(shù)。7、蛋白免疫印跡(Western-blot)法檢測(cè)心肌組織MDM2、P53蛋白表達(dá)。8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,組間比較采用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn),相關(guān)指標(biāo)之間采用直線相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、大鼠一般情況指標(biāo):⑴血糖:DM組較NC組血糖升高(P<0.01)。⑵體重:DM組較 NC組體重明顯減輕(P<0.01)。⑶心體比及左

6、心室重量指數(shù):DM組較 NC組心體比及左心室重量指數(shù)均增加(P<0.01)。2、HE染色:DM組心肌細(xì)胞體積增大(P<0.01)。3、Masson染色: DM組較 NC組心肌膠原纖維增多(P<0.01)。4、TUNEL:DM組較NC組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增加(P<0.01)。5、電鏡:NC組心肌細(xì)胞形態(tài)正常,肌絲豐富、排列緊密,線粒體形態(tài)正常;DM組心肌細(xì)胞肥大,心肌稀疏,部分有斷裂甚至溶解,線粒體腫脹。6、心臟組織MDM2、P53蛋白表達(dá)

7、:與NC組比較,DM組P53蛋白表達(dá)增加,MDM2蛋白表達(dá)減少。7、p53和MDM2蛋白表達(dá)成負(fù)相關(guān);p53與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、左心室重量、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)均成正相關(guān);MDM2與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、左心室重量、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)均成負(fù)相關(guān)。結(jié)論：1、糖尿病心肌病時(shí)存在心肌細(xì)胞凋亡、心肌細(xì)胞肥大及心肌肥厚、心肌纖維化。2、糖尿病心肌病時(shí)p53蛋白表達(dá)增加而MDM2蛋白表達(dá)降低。3、p53可引起心肌細(xì)胞凋亡、心肌纖維化及心室肥厚，而MDM2可以