2型糖尿病心肌病的發(fā)病機(jī)制及?；撬岜Ｗo(hù)糖尿病大鼠心肌的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、第一部分:大鼠2型糖尿病心肌病模型的建立方法 目的:制備發(fā)病過(guò)程類似人類的大鼠2型糖尿病心肌病模型。 方法:用雌性4周齡wistar大鼠87只，隨機(jī)抽取7只給予普通飼料，其余80只給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)4周造成胰島素抵抗(78只，2只死亡)后，隨機(jī)選其中14只腹腔注射枸櫞酸鈉緩沖液，分為胰島素抵抗組1(n=7)和胰島素抵抗組2(n=7)；其余64只用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射(小劑量多次)誘發(fā)2型糖尿病(59只，空腹血糖

2、≥16.7mmol/L)。第28周末(自購(gòu)買之日起)，通過(guò)頸動(dòng)脈插管，測(cè)等容舒張期左室內(nèi)壓力下降的最大速率(-dp/dtmax)；彩色多譜勒檢測(cè)左室射血分?jǐn)?shù)(EF)；稱取心臟重量(HW)，通過(guò)凋亡試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(CAI)。 結(jié)果:第28周末，59只2型糖尿病大鼠中49只-dp/dtmax絕對(duì)值＜5250mmHg/s，為心肌病組(n=49)，其-dp/dtmax絕對(duì)值明顯低于胰島素抵抗組1(p＜0.01)。從心肌病組隨

3、機(jī)抽取8只大鼠，作為心肌病亞組(n=8)，其HW、CAI明顯高于胰島素抵抗組1(p＜0.01)；EF略微低于胰島素抵抗組1，但無(wú)顯著差異性(p＞0.05)。 結(jié)論:高糖高脂飲食喂養(yǎng)4周造成胰島素抵抗后，鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射(小劑量多次)，第28周末，49只大鼠-dp/dtmax絕對(duì)值＜5250mmHg/s，提示49只2型糖尿病心肌病模型成功復(fù)制。 第二部分:2型糖尿病心肌病的發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究 目的:研究

4、血管緊張素Ⅱ受體2型(AT2)對(duì)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。 方法:用雌性4周齡wistar大鼠87只，隨機(jī)抽取7只給予普通飼料，其余80只給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)4周造成胰島素抵抗(78只，2只死亡)后，隨機(jī)選其中14只腹腔注射枸櫞酸鈉緩沖液分為胰島素抵抗組1(n=7)和胰島素抵抗組2(n=7)；其余64只用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射4周，其中59只成功誘發(fā)為2型糖尿病(空腹血糖≥16.7mmol/L)，第28周末，通過(guò)頸動(dòng)脈

5、插管將等容舒張期左室內(nèi)壓力下降的最大速率(-dp/dtmax)絕對(duì)值＜5250mmHg/s的糖尿病大鼠，被人為成功復(fù)制成糖尿病心肌病(49只)，其中8只隨后立即處死(心肌病亞組，n=8)，其余41只分組如下：9只用等量的雙蒸水腹腔注射，為心肌病無(wú)干預(yù)組；12只通過(guò)腹腔注射AT2激動(dòng)劑(CGP42112A)，為激動(dòng)劑組；10只腹腔注射AT2拮抗劑(PD123319)，為拮抗劑組，余10只另有他用。以上注射每天一次連續(xù)4周。第32周末，心肌

6、病無(wú)干預(yù)組的大鼠存活7只，激動(dòng)劑組存活8只，拮抗劑組存活9只，將上述存活者稱取心臟重量，通過(guò)凋亡試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)心肌細(xì)胞AT2和Bcl-2mRNA量，免疫組化染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞上AT2和Bcl-2蛋白質(zhì)量。 結(jié)果:激動(dòng)劑組和拮抗劑組、心肌病無(wú)干預(yù)組的-dp/dtmax、絕對(duì)值分別顯著低于胰島素抵抗組2(p＜0.01)，而心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、AT2的mRNA量和蛋白質(zhì)表達(dá)量及心臟重

7、量卻分別顯著高于胰島素抵抗組2(p＜0.01)；激動(dòng)劑組、拮抗劑組的心肌凋亡指數(shù)分別顯著高于心肌病無(wú)干預(yù)組(p＜0.01)，而AT2的mRNA量和蛋白質(zhì)表達(dá)量分別顯著低于心肌病無(wú)干預(yù)組(p＜0.01)；激動(dòng)劑組的心肌凋亡指數(shù)、AT2的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量及心臟重量測(cè)定分別顯著高于拮抗劑組(p＜0.01)；各組Bcl-2變化正好與AT2變化相反。 結(jié)論:AT2的高表達(dá)促進(jìn)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞的凋亡，可能是糖尿病心肌病的重要促發(fā)因素

8、之一。 第三部分:?；撬岜Ｗo(hù)糖尿病大鼠心肌的實(shí)驗(yàn)研究 目的:探討?；撬釋?duì)糖尿病大鼠心肌的保護(hù)作用機(jī)制。 方法:用雌性4周齡wistar大鼠87只，隨機(jī)抽取7只給予普通飼料，其余80只給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)4周造成胰島素抵抗(78只，2只死亡)后，隨機(jī)選其中14只腹腔注射枸櫞酸鈉緩沖液分為胰島素抵抗組1(n=7)和胰島素抵抗組2(n=7)；其余64只用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射4周，其中59只成功誘發(fā)為2型糖尿病(

9、空腹血糖≥16.7mmol/L)，第28周末，通過(guò)頸動(dòng)脈插管將等容舒張期左室內(nèi)壓力下降的最大速率(-dp/dtmax)絕對(duì)值＜5250mmHg/s的糖尿病大鼠，被人為成功復(fù)制成糖尿病心肌病(49只)，其中8只隨后立即處死(心肌病亞組，n=8)，其余41只分組如下：9只用等量的雙蒸水腹腔注射，為心肌病無(wú)干預(yù)組；12只通過(guò)腹腔注射AT2激動(dòng)劑(CGP42112A)，為激動(dòng)劑組；10只腹腔注射牛磺酸，為牛磺酸組，余10只另有他用。以上注射每天

10、一次連續(xù)4周。第32周末，心肌病無(wú)干預(yù)組存活7只，激動(dòng)劑組存活8只，?；撬峤M存活9只，處死后稱取心臟重量，通過(guò)凋亡試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)心肌細(xì)胞AT2和Bcl-2mRNA量，免疫組化染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞上AT2和Bcl-2蛋白質(zhì)量。 結(jié)果:激動(dòng)劑組和?；撬峤M、心肌病無(wú)干預(yù)組-dp/tdtmax、絕對(duì)值顯著低于胰島素抵抗組2(p＜0.01)；三組糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、AT2的蛋白質(zhì)

11、表達(dá)量及心臟重量均顯著高于胰島素抵抗組2(p＜0.01)；激動(dòng)劑組、牛磺酸組心肌凋亡指數(shù)、AT2的蛋白質(zhì)表達(dá)量分別顯著高于、顯著低于心肌病無(wú)干預(yù)組(p＜0.01)；激動(dòng)劑組心肌的凋亡指數(shù)、AT2的蛋白質(zhì)表達(dá)量及心臟重量測(cè)定分別顯著高于?；撬峤M(p＜0.01)；Bcl-2變化正好與AT2變化相反。 結(jié)論:AT2的高表達(dá)促進(jìn)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞的凋亡，可能是糖尿病心肌病的重要促發(fā)因素之一；牛磺酸可以通過(guò)下調(diào)AT2的表達(dá)保護(hù)糖尿病大鼠心