自噬影響肌聯(lián)蛋白表達(dá)在糖尿病心肌病中的作用研究.pdf

1、目的：自噬在細(xì)胞內(nèi)會(huì)形成具有典型雙層膜結(jié)構(gòu)的的囊泡（自噬體），自噬體內(nèi)包含有待降解的蛋白質(zhì)和（或）受損的細(xì)胞器，含有這些待降解物質(zhì)的自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體，自噬溶酶體內(nèi)的蛋白酶將其內(nèi)含物消化成氨基酸等能量物質(zhì)供細(xì)胞維持其穩(wěn)態(tài)。在糖尿病病理生理狀態(tài)下，心肌細(xì)胞自噬水平會(huì)顯著增加。心肌細(xì)胞內(nèi)過度激活的自噬有可能影響心肌肌纖維及線粒體的功能，從而引起心臟舒張功能的改變。抑制過度激活的自噬可能通過影響心肌肌聯(lián)蛋白的功能從而對糖尿病引起

2、的射血分?jǐn)?shù)保留型心力衰竭起到治療作用。
　　方法：①采用STZ誘導(dǎo)的I型糖尿病小鼠模型。利用心臟彩色超聲心動(dòng)圖技術(shù)觀察糖尿病小鼠心臟功能。②采用STZ誘導(dǎo)的I型糖尿病小鼠模型，觀察腹腔注射自噬抑制劑氯喹、3-MA和自噬激動(dòng)劑雷帕霉素14天小鼠血糖、體重；末次給藥后，彩色超聲多普勒觀察各組小鼠心臟功能；Western Blot分析小鼠自噬相關(guān)蛋白LC3、p62的表達(dá)；透射電鏡觀察各組小鼠自噬體及自噬溶酶體數(shù)量；瓊脂糖凝膠電泳后銀染法

3、觀察小鼠心肌肌聯(lián)蛋白N2BA和N2B兩種亞型比值。
　　結(jié)果：① STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠在成模后第7周開始出現(xiàn)心臟舒張功能障礙，小鼠心臟EF（Ejection Fraction;射血分?jǐn)?shù)）、FS（Fractional shortening；短軸縮短率）等收縮功能指標(biāo)無明顯變化，舒張功能指標(biāo)E/A峰倒置，MVDT（E-wave decelaration time）延長。②糖尿病小鼠給予自噬調(diào)節(jié)劑14天，糖尿病模型組及給藥組相較于正常

4、對照組血糖顯著上升（P<0.01），糖尿病各組均出現(xiàn)了體重較正常對照組明顯減輕（P<0.01），雷帕霉素組小鼠體重較糖尿病對照組進(jìn)一步降低（P<0.01）。除雷帕霉素組出現(xiàn)心率較糖尿病對照組明顯降低（P<0.01）外，其余各組均無明顯變化。③糖尿病小鼠各組心臟體重均較正常對照組明顯降低（P<0.01）。雷帕霉素組小鼠較糖尿病對照組心臟體重明顯降低（P<0.01），心臟重量指數(shù)各組除雷帕霉素組外其余組均較正常對照組明顯降低（P<0.05）

5、，左心室重量指數(shù)糖尿病對照組和雷帕霉素組較正常組明顯降低外（P<0.05），其余組均無明顯變化（P>0.05）。④腹腔注射自噬抑制劑氯喹后，糖尿病收縮功能指標(biāo)EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照組無顯著差異（P>0.05），糖尿病小鼠舒張功能指標(biāo) E/A峰與糖尿病對照組相比顯著增加（P<0.01）、MVDT與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.05）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.01）。自噬相關(guān)蛋

6、白LC3-II/LC3-I比值較糖尿病對照組顯著降低（P<0.05），p62蛋白的表達(dá)較糖尿病對照組顯著增加（P<0.01），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數(shù)量較糖尿病對照組顯著減少。腹腔注射自噬抑制劑3-MA后，糖尿病收縮功能指標(biāo)EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照組無顯著差異（P>0.05），糖尿病小鼠舒張功能指標(biāo)E/A峰與糖尿病對照組相比無顯著變化（P>0.05），與正常對照組相比顯著降低（P<0.05）、MVDT與糖尿病對照組

7、及正常對照組相比無顯著變化（P>0.05）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與糖尿病對照組相比無顯著變化（P>0.05），相對于正常對照組顯著增加（P<0.01）。自噬相關(guān)蛋白LC3-II/LC3-I比值較糖尿病對照組顯著降低（P<0.05），p62蛋白的表達(dá)較糖尿病對照組顯著增加（P<0.01），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數(shù)量較糖尿病對照組減少。腹腔注射自噬增強(qiáng)劑雷帕霉素后，糖尿病收縮功能指標(biāo)EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照

8、組無顯著差異（P>0.05），小鼠舒張功能E/A峰與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.05），與正常對照組相比顯著降低（P<0.01），MVDT與正常對照組相比顯著增加（P<0.01）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與正常對照組相比顯著增加（P<0.01）。自噬相關(guān)蛋白LC3-II/LC3-I比值較正常對照組顯著增加（P<0.01），p62蛋白的表達(dá)較正常對照組明顯增加（P<0.05），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數(shù)量較正常對照組和