柚皮苷調(diào)控心肌PPARγ表達對糖尿病心肌病大鼠心臟結(jié)構(gòu)功能的影響.pdf

1、[目的]
　　 系統(tǒng)研究藥用植物有效成分柚皮苷(Naringin)對糖尿病心肌病(Diabeticcardiomyopathy，DCM)的防治作用及其機理，利用現(xiàn)代科學技術(shù)從基因調(diào)控因子過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ，PPARγ)層面闡釋其對DCM心臟結(jié)構(gòu)功能的影響，為傳統(tǒng)藥用植物的臨床應用和DCM新藥開發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　 [方法]

2、
　　 高糖高脂喂養(yǎng)和鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)的方法建立具備胰島素抵抗(Insulin Resistance，IR)特征的DCM大鼠模型，在比較DCM成模中不同病程的大鼠能量代謝差異基礎(chǔ)上，觀察DCM大鼠的心肌結(jié)構(gòu)功能病變及藥物的干預作用。
　　 高糖高脂飼料灌服大鼠6周繼而腹腔內(nèi)注射(intraperitoneal injection，i.P.)小劑量STZ，選擇i.P.STZ后空腹血糖大于1

3、1.1 mmol/L的大鼠隨機分為五組模型組(MC組)和Naringin高、中、低劑量治療組(NH組：40mg/kg，NM組：20 mg/kg，NL組：10 mg/kg)、吡格列酮陽性對照組(PC組：1.0mg/kg)，另設(shè)正常對照組(NC組)平行觀察。除NC組和MC組外，各組大鼠分別予以不同藥物干預治療6周，同時維持高糖高脂飼養(yǎng)至實驗結(jié)束。
　　 實驗中，定期記錄大鼠的進食量、體重、飲水量、尿量等一般體征，檢測大鼠空腹血糖、餐

4、后血糖和葡萄糖耐量。實驗全部結(jié)束后處死大鼠，采血分離血清，采用生化法檢測大鼠糖化血清蛋白、血脂常規(guī)、游離脂肪酸等指標，應用免疫熒光定量檢測腦鈉肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)和心肌肌鈣蛋白I(CardiacTroponin I，cTnI)表達水平；采用免疫組織化學法測定心肌組織PPARγ表達；對各組大鼠心臟進行HE染色，觀察DCM大鼠心肌組織的病理改變；應用透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　

5、 [結(jié)果]
　　 1.高糖高脂喂養(yǎng)十STZ方法能建立DCM大鼠模型：該模型具有一般2型DM特征(多飲、多食、多尿、IR以及糖脂代謝紊亂等)；同時具有心肌細胞學病理改變(心肌細胞肥大、變性、間質(zhì)膠原纖維增生)和心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷性變化(肌原纖維排列紊亂、線粒體明顯增多、線粒體嵴斷裂、溶解、細胞核核膜不完整、異染色質(zhì)凝聚等)；兩個病程(STZ i.P.后72小時和6周)的MC組大鼠在BMI、血糖、血脂、胰島素水平的變化沒有統(tǒng)計學

6、差異(P>0.05)，但都顯著高于NC組(P<0.05)。
　　 2.Naringin具有改善糖脂代謝的作用：在糖代謝方面，與MC組相比，Naringin各劑量均可降低DCM大鼠的空腹血糖、糖化血清蛋白(P<0.05)，改善葡萄糖耐量；Naringin高劑量具有顯著降低空腹胰島素以及改善IR的作用(P<0.05)。在脂代謝方面，Naringin高、中劑量均可顯著降低模型大鼠的血清總膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯水平和游離脂肪酸(

7、P<0.05)。在改善糖代謝指標方面，Naringin不如吡格列酮，但在血清總膽固醇、低密度脂蛋白水平和游離脂肪酸的改善方面，Naringin高劑量作用要略優(yōu)于吡格列酮(P<0.05)；Naringin高、中劑量還可明顯減少DCM大鼠BMI的增加(P<0.05)。
　　 3.Naringin具有心肌細胞保護作用：Naringin高、中劑量可以呈劑量依賴性防止DCM大鼠心肌出現(xiàn)心肌細胞排列紊亂、疏松，心肌細胞肥大、變性等病理變化；

8、Naringin高劑量和吡格列酮可明顯防止大鼠心肌的超微結(jié)構(gòu)改變(肌原纖維排列基本整齊、線粒體和細胞核形態(tài)基本正常)。并且Naringin高劑量作用略優(yōu)于吡格列酮。
　　 4.Naringin具有改善心功能的作用：與NC組相比，MC組大鼠心臟/體重指數(shù)和BNP蛋白表達水平均明顯增高(P<0.01)；而各組中cTnI蛋白表達無明顯統(tǒng)計學差異。Naringin各劑量能不同程度減少心肌BNP蛋白分泌和降低心臟/體重指數(shù)，吡格列酮能明顯

9、抑制BNP表達水平上調(diào)，與MC組比較，BNP蛋白表達減少(p<0.01)。Naringin高劑量也能顯著改善DCM大鼠心肌細胞的BNP蛋白表達水平(P<0.01)；并且優(yōu)于吡格列酮(P<0.05)。
　　 5.Naringin具有調(diào)控心肌PPARγ，蛋白表達的作用：MC組大鼠心肌PPARγ蛋白表達均顯著高于NC組(P<0.05)；PPARγ/在NH、NM組和PC組大鼠心肌表達顯著低于MC組(P<0.05)，三組間無統(tǒng)計學差異(P

10、>0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 DCM的關(guān)鍵啟動因素為糖代謝異常，由于持續(xù)的高血糖以及IR，導致心肌細胞能量代謝障礙，引起心肌細胞結(jié)構(gòu)與功能受損，心功能衰竭逐漸加重。本研究結(jié)果證明，以偏重于消炎化痰為主的理氣中藥化橘紅有效成分Naringin能有效防治DCM，而且高劑量Naringin在改善大鼠心臟結(jié)構(gòu)功能方面優(yōu)于吡格列酮。對心肌的保護作用并不完全依賴于降血糖效應，可能與干擾PPARγ蛋白表達有關(guān)，通過下調(diào)心肌PP