柚皮苷對(duì)糖尿病心肌病大鼠FABP4、FFA及心肌超微結(jié)構(gòu)的干預(yù)作用.pdf

1、[目的]：
　　本研究通過(guò)觀察游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)和脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（Adipocyte fatty acid binding protein，F(xiàn)ABP4）在糖尿病心肌病(DCM)大鼠血清中的動(dòng)態(tài)表達(dá)、心肌超微結(jié)構(gòu)變化以及柚皮苷(NRG)干預(yù)的影響，探討柚皮苷保護(hù)DCM大鼠心肌的機(jī)制，為探求DCM新的防治靶點(diǎn)及為柚皮苷防治DCM提供理論依據(jù)。
　　[方法]：
　　將60只大鼠首先

2、隨機(jī)分為正常組（N組，10只）和模型組（M組，50只），N組一直喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料;M組先喂養(yǎng)6周高糖高脂飼料后一次性予腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ)進(jìn)行DCM造模，監(jiān)測(cè)血糖判定造模成功后，再對(duì)M組進(jìn)行隨機(jī)分為5組:對(duì)照組（C組）和柚皮苷高劑量治療組（NH組）、柚皮苷中劑量治療組(NM組)、柚皮苷低劑量治療組(NL組)和阿托伐他汀治療組（R組）。分別予生理鹽水、NRG80mg/kg、NRG40mg/kg、NRG20mg/kg、阿托伐他汀(

3、10mg/kg)進(jìn)行灌胃干預(yù)治療6周，N組也予生理鹽水灌胃6周。各組每周稱重、測(cè)血糖、記錄一般狀態(tài)。干預(yù)6周后各組經(jīng)腹腔麻醉后經(jīng)心臟取血，處死后迅速取心臟測(cè)定心重指數(shù)，自動(dòng)生化儀測(cè)定甘油三酯、總膽固醇水平，酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清FABP4濃度，銅顯色法測(cè)定血清FFA含量，光鏡和電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。
　　[結(jié)果]：
　　1.DCM大鼠造模成功，5組血糖基線水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，血糖變化與C組比

4、較，NH組、NM組、NL組血糖降低有顯著差異(P＜0.05)，NH組、NM組、NL組呈劑量依賴性。
　　2.C組甘油三酯及總膽固醇水平與N組比較明顯升高(P＜0.05)，考慮DCM大鼠出現(xiàn)脂代謝紊亂;經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，與C組比較，NH組、NM組、NL組和R組其甘油三酯及總膽固醇水平下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，以R組下降幅度最為明顯，NH組、NM組、NL組呈劑量依賴性。心肌重構(gòu)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)心重指數(shù)變化與C組比較，藥物干預(yù)組均有改善

5、(P＜0.05)，以NH組心重指數(shù)下降明顯。
　　3.所有實(shí)驗(yàn)組大鼠中FABP4與FFA進(jìn)行相關(guān)性分析，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其血清FABP4與FFA具有正相關(guān)關(guān)系;血清FABP4、FFA的表達(dá)，藥物干預(yù)組與C組比較均有明顯下調(diào)，其中NH組及R組效果要優(yōu)于其它組(P＜0.05)，而該兩組中，NH組與R組效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(P＞0.05)。NH、NM、NL組呈劑量依賴性。
　　4.心肌重構(gòu)形態(tài)學(xué)變化:①光鏡觀察結(jié)果顯

6、示:N組心肌細(xì)胞形態(tài)均勻，排列規(guī)律，肌束內(nèi)見(jiàn)少量結(jié)締組織及豐富的毛細(xì)血管，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);與N組相比，C組可見(jiàn)大部分心肌細(xì)胞肥大、排列紊亂，部分心肌細(xì)胞纖維斷裂，纖維組織局灶性增生，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。NM、NH組心肌細(xì)胞排列較規(guī)律，未見(jiàn)明顯腫脹、變性，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，其中NH組及NM組抑制心肌重構(gòu)優(yōu)于其它干預(yù)組，NL組及R組中部分心肌細(xì)胞腫脹，肌纖維排列紊亂，肌束內(nèi)散在少量炎細(xì)胞。②電鏡觀察結(jié)果顯示:N組肌纖維排列規(guī)則，心肌

7、纖維間閏盤(pán)清晰、連續(xù)，結(jié)構(gòu)完整;肌原纖維中可見(jiàn)規(guī)律的明帶及暗帶，暗帶中央M線及明帶中央Z線容易辨認(rèn)，形成明暗相間的肌節(jié)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞核位于心肌細(xì)胞中央部位，細(xì)胞核核膜完整，線粒體結(jié)構(gòu)完整。C組心肌纖維走行紊亂，線粒體明顯腫脹，部分線粒體嵴斷裂消失、細(xì)胞膜破損，細(xì)胞間質(zhì)纖維增生，閏盤(pán)斷裂模糊，部分融合后形成高密度電子斑塊，微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變性;R組及NL組可見(jiàn)部分心肌纖維排列失去規(guī)律性、肌節(jié)結(jié)構(gòu)模糊，閏盤(pán)輕度融合現(xiàn)象，部分血管內(nèi)皮細(xì)胞輕微

8、腫脹;NM、NH組的心肌纖維排列較規(guī)律，細(xì)胞核及閏盤(pán)結(jié)構(gòu)尚正常，間質(zhì)血管內(nèi)皮無(wú)明顯改變，線粒體個(gè)別腫脹及膜破損。
　　[結(jié)論]：
　　本研究通過(guò)高糖高脂飲食后腹腔注射小劑量STZ法建立SD大鼠DCM模型穩(wěn)定可靠。血清FABP4可能可作為預(yù)測(cè)DCM患者中脂質(zhì)損害嚴(yán)重性的一個(gè)重要指標(biāo)，并且可能成為DCM患者治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。對(duì)比探討DCM大鼠的干預(yù)治療，結(jié)果表明柚皮苷具有降低血糖、降低甘油三酯及總膽固醇，下調(diào)血清FABP4及FF