糖尿病心肌病的組織病理學及與心肌纖維化相關細胞因子TGF-β-,1-和凋亡相關蛋白Fas在糖尿病心肌病中發(fā)生的作用.pdf

1、背景資料：隨著社會發(fā)展特別飲食結構的改變，我國糖尿病(DM，diabetesmallitus)發(fā)病率逐年上升。近年來學者對我國大宗DM患病率流行病學調查顯示：發(fā)病率隨年齡逐年上升，六十歲以上老年人DM患病率超過11％。心血管疾病(CVD，Cardiovascular Disease)是DM最常見也是最重要的并發(fā)癥，據美國糖尿病協(xié)會的統(tǒng)計：在美國DM患者死亡病例中，接近80％是由于心血管并發(fā)癥所引起。過去幾十年的時間里，學者一直關注于心肌

2、以及心肌間血管以及冠狀動脈的形態(tài)學改變，隨著研究工作的進展，人們越來越多的開始關注心肌機能紊亂的發(fā)病機理，并且認識到糖尿病心肌病(DCM，diabetic cardiomyopathy)在其中所具有的重要性。
　　 目的：觀察DM患者心肌病理組織學特點；探討DCM的病理組織診斷和可能的發(fā)生機制，及其同心臟功能異常的相關性。
　　 材料及方法：本研究在北京醫(yī)院1990—2008年700例成人尸檢資料中，選取其中40例臨床病

3、史清晰、實驗室檢查資料完整，病程3年以上的II型DM患者作為研究對象，另選與DM組年齡、性別相匹配的非DM的病例40例作為對照，所有尸檢皆為死亡12—24小時內進行。
　　 (一)大體觀察：對這80例心臟標本均進行仔細地大體觀察并對冠狀動脈每隔0.2—0.5厘米橫切觀察動脈粥樣硬化情況，后于左心室前壁、心尖部、左心外側壁、二尖瓣下1厘米、室間隔、右心室及左、右心房取材。標本經4％甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切4微米厚的連續(xù)

4、切片，HE及VG染色。
　　 (二)光鏡觀察。對心肌細胞壞死，心肌間瘢痕灶及心肌間細、小動脈的病理組織形態(tài)進行重點觀察。在高倍鏡視野下對心肌細胞微小壞死灶及心肌間微小纖維瘢痕灶進行計數，每例數20—30個視野，最后得到每例心肌細胞微小壞死灶及心肌間微小纖維瘢痕灶的平均數(個/HPF)。在200倍顯微鏡視野下，用1厘米長線標測微尺測量心肌間細、小動脈壁厚度、管腔外徑直徑及兩者之間的比例。每例取20—30個條血管，平均取25條血管進

5、行測量，最后得到每例心肌間細、小動脈壁厚度、管腔外徑直徑及兩者之間的比例的平均數。
　　 (三)免疫組化：二組病例均選擇相對不易發(fā)生心肌梗死的左心室側壁區(qū)域，于二尖瓣下1厘米處心肌標本取材，常規(guī)固定，脫水，石蠟包埋，切4μm連續(xù)切片，進行免疫組化標記C—III(III型膠原，Collagen III)、TGF—β1(轉化生長因子—β1，Transforming Growth factor—β1)、Fas(Fas蛋白，Fas pr

6、otein)。
　　 (四)特殊染色及免疫組化圖像分析：V.G染色及三種免疫組化切片均進行圖像分析，每例取5個無明確瘢痕及片狀纖維化區(qū)域高倍顯微鏡視野，固定白平衡，感光度及快門速度等拍攝條件，拍攝Jpeg格式圖像，采用專業(yè)醫(yī)學分析測量圖像軟件image pro—plus V5.2對兩組樣本進行積分光密度(integrating opticaldensity，IOD)分析。對比觀察分析兩組樣本膠原纖維總量，III型膠原，TGF—β

7、1以及Fas積分光密度。
　　 (五)統(tǒng)計學分析
　　 統(tǒng)計學分析采用SPSS11.5軟件包進行，p＜0.05為具有統(tǒng)計學差異。
　　 結果：1.形態(tài)學觀察：40例糖尿病中36例(90.0％)有微小心肌細胞壞死，37例(92.5％)有微小心肌間纖維癱痕灶形成。40例非糖尿病僅8例(20.0％)有微小心肌細胞壞死，9(22.5％)例有微小心肌間纖維癱痕灶形成，二組相比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。糖尿病組心肌

8、間微小血管壁明顯增厚(20.61.μm±4.2)，與對照組(7.2μm±5.2)比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 2.V.G染色及免疫組化染色結果：V.G染色及C—III免疫組化染色圖像分析顯示DM組膠原纖維及III型膠原的分布面積及表達強度遠高于對照組，DM組和對照組的VG染色IOD值分別為7.944±2.43和3.57±1.64；C—III免疫組化染色IOD值分別為637.66±336.56和135.41±97.

9、44，二組相比具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。TGF—β1免疫組化表達同膠原纖維分布面積和強度呈正相關，DM組和對照組TGF—β1 IOD值分別為2101.38±829.33和409.59±260.17，兩組表達相比具有顯著差異(P＜0.05)。Fas免疫組化檢測DM組的表達較強，面積廣，IOD值為454.12±220.71，而對照組心肌細胞Fas表達弱，表達面積及強度小于糖尿病組，IOD值為102.61±51.60，兩組表達相比具有顯

10、著差異(P＜0.05)。
　　 結論：1.微小心肌細胞壞死，微小心肌間瘢痕灶形成，心肌間微小血管壁增厚可能是糖尿病心肌病的病理形態(tài)學特點，對糖尿病心肌病的診斷有重要意義。2.糖尿病患者心肌間質纖維化面積及程度比對照組明顯增加，提示糖尿病患者心肌間質的纖維化可能是導致其心臟并發(fā)癥重要因素之一。3.TGF— B1在糖尿病患者心肌表達明顯高于對照組，提示其在心肌間質纖維化過程中可能具有一定的意義。4.Fas表達在DM組顯著高于對照組，