EGCG經(jīng)AKT1-Mdm-2-p53途徑抑制卵巢癌HO-8910細胞的增殖.pdf

1、目的:卵巢癌是嚴重威脅我國婦女健康的三大女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一?；熓侵委熉殉舶┑闹匾侄?提高了中晚期卵巢癌患者的緩解率,但許多化療藥物的副作用和耐藥,使部分患者臨床療效難盡人意。本研究旨在探討 EGCG對卵巢癌 HO-8910細胞增殖的抑制作用及其機制,為開發(fā)與尋找新的抗卵巢癌藥物提供實驗資料。
　　方法:本研究采用MTT法檢測EGCG抑制卵巢癌HO-8910細胞增殖的IC50值;通過繪制細胞生長曲線、平皿克隆形成實驗和軟瓊

2、脂集落形成實驗觀察 EGCG對HO-8910細胞增殖的抑制作用;利用流式細胞儀檢測EGCG對HO-8910細胞周期與細胞凋亡的影響;選用RT-PCR檢測EGCG處理HO-8910細胞后AKT1、Mdm-2與 p53基因的表達;運用免疫細胞化學染色和Western-blot檢測 EGCG處理HO-8910細胞后AKT1蛋白、Mdm-2蛋白與p53蛋白的磷酸化情況。
　　結果:(1) MTT結果顯示EGCG可有效抑制HO-8910細胞

3、的增殖,其IC50值為64.87mg·L-1(n=3,P<0.05)。(2)細胞生長曲線結果顯示EGCG可有效抑制HO-8910細胞的增殖,且呈時間效應關系(n=3,P<0.05)。(3)平皿克隆形成實驗結果顯示65.0 mg·L-1 EGCG(≈IC50值)處理HO-8910細胞后,克隆體積變小,數(shù)目減少, EGCG對HO-8910細胞平皿克隆形成具有抑制作用(n=3,P<0.05)。(4)軟瓊脂集落形成實驗結果顯示65.0 mg·L

4、-1EGCG處理HO-8910細胞后集落體積變小,數(shù)目減少,EGCG對HO-8910細胞集落形成具抑制作用(n=3,P<0.05)。(5)流式細胞儀檢測結果顯示,65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細胞后G1期細胞比例增加,S期細胞比例降低,細胞的凋亡率增加。(6)RT-PCR檢測結果顯示,65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細胞后,AKT1與Mdm-2基因表達降低,而p53基因的表達升高(P<0.05)。(

5、7)免疫細胞化學染色檢測結果顯示,p-AKT1蛋白與p-Mdm-2蛋白主要在HO-8910細胞漿與細胞核表達;65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細胞后AKT1與Mdm-2蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05)。p-p53蛋白在HO-8910細胞核表達;EGCG處理后p53蛋白磷酸化水平增加(P<0.05)。(8)Western-blotting檢測結果顯示,65.0 mg·L-1EGCG處理HO-8910細胞后AKT1蛋白