CXCR7及其配體CXCL12對人卵巢癌HO8910細(xì)胞增殖、粘附和侵襲能力的影響.pdf

1、卵巢癌在所有女性常見惡性腫瘤中致死率最高，其早期癥狀極不明顯且極易擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，因此，探究卵巢癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等行為的分子機(jī)制對于改善卵巢癌的診治和預(yù)后，提高患者生存率有著非常重大的意義。人類多種腫瘤細(xì)胞中都有趨化因子12（CXC chemokine ligand-12,CXCL12）及其受體CXCR7和CXCR4的表達(dá)，CXCR7/CXCL12生物調(diào)控軸在包括腫瘤惡性增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、腫瘤血管生成等腫瘤發(fā)展過程中也有著不可輕視的調(diào)控作用。

2、有研究顯示卵巢癌細(xì)胞HO8910表達(dá)CXCR7而且多種細(xì)胞活動(dòng)受其調(diào)控，所以本研究以HO8910細(xì)胞為對象，設(shè)計(jì)CXCR7基因沉默體系下調(diào)CXCR7表達(dá)，使用CXCR4的拮抗劑AMD3100來阻斷CXCR4的正常功能，觀察檢測CXCR7/CXCL12生物調(diào)控軸對HO8910細(xì)胞擴(kuò)增、粘附及侵襲轉(zhuǎn)移等能力的影響，并試圖闡明此生物調(diào)控軸在卵巢癌惡性增殖擴(kuò)散等過程的中的調(diào)控機(jī)制，從而為卵巢癌的診斷、治療和預(yù)后提供新的靶點(diǎn)與思路。
　　研

3、究方法及結(jié)果：
　　1、根據(jù)人類CXCR7基因信息設(shè)計(jì)合成了27mersiRNA來下調(diào)CXCR7基因的表達(dá)水平，優(yōu)化轉(zhuǎn)染體系并驗(yàn)證此體系的沉默效率。使用免疫印跡法（Western blotting）和實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)分別檢測CXCR7基因沉默前后卵巢癌細(xì)胞HO8910中CXCR7、CXCR4的蛋白和CXCR7 mRNA表達(dá)水平。確認(rèn)在HO8910細(xì)胞中表達(dá)CXCR4和CXCR7，且在使用siRNA沉默HO8910細(xì)胞中的CXCR7

4、基因后，CXCR7 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低。
　　2、使用CXCR7基因沉默體系下調(diào)HO8910細(xì)胞中CXCR7的表達(dá)，使用CXCR4的小分子拮抗劑AMD3100阻斷CXCR4的正常功能。然后使用CCK-8法檢測對CXCL12參與調(diào)控的HO8910細(xì)胞增殖能力的影響；通過結(jié)晶紫染色法檢測對CXCL12參與調(diào)控的HO8910細(xì)胞粘附能力的影響；在Transwell小室腫瘤侵襲模型中來進(jìn)行體外侵襲能力檢測，以此檢測CXCL1

5、2誘導(dǎo)調(diào)控的HO8910細(xì)胞的侵襲能力的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：CXCL12能夠顯著地提高HO8910細(xì)胞增殖、粘附、侵襲能力。下調(diào)CXCR7基因表達(dá)或者阻斷CXCR4蛋白功能均可導(dǎo)致由CXCL12誘導(dǎo)調(diào)控的HO8910細(xì)胞體外粘附能力、細(xì)胞增殖能力以及侵襲能力的顯著下降。而且當(dāng)單獨(dú)下調(diào)CXCR7基因表達(dá)時(shí)對HO8910細(xì)胞體外粘附能力、細(xì)胞增殖能力的抑制效果更加明顯，單獨(dú)阻斷CXCR4蛋白正常功能時(shí)對HO8910細(xì)胞侵襲能力的