紫花牡荊素對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞活性氧生成和凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　觀察活性氧在紫花牡荊素（Casticin, CAS）誘導(dǎo)的人卵巢癌HO-8910細(xì)胞凋亡中的作用，探討CAS誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡是否涉及活性氧介導(dǎo)的線粒體凋亡誘導(dǎo)信號(hào)途徑。
　　方法：
　　1. Annexin V-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)分析CAS對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞凋亡的影響；
　　2. H2DCFH-DA探針FCM檢測(cè)CAS對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)

2、胞活性氧生成影響；
　　3.羅丹明123探針(Rhodamine123，Rh123)FCM分析 CAS對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞線粒體跨膜電位的影響；
　　4. Western blot分析CAS對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞Cyt C、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)和活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1. Annexin V-FITC/PI雙染色FCM分析結(jié)果顯示 CAS(2.0和4.0μg/mL)處理人卵巢癌HO-8

3、910細(xì)胞48小時(shí)的細(xì)胞凋亡率分別為：9.46±0.95％，14.47±1.47%(p﹤0.01），明顯高于10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)預(yù)處理組(4.63±0.57%，5.30±0.50%)（p﹤0.01），及溶媒對(duì)照組（DMSO，0.3±0.10%）；
　　2. H2DCFH-DA熒光探針FCM分析結(jié)果表明CAS(2.0和4.0μg/mL)處理48小時(shí)的人卵巢癌HO-89

4、10細(xì)胞H2DCFH-DA平均熒光強(qiáng)度分別為：36.73±1.52，57.53±2.83；明顯高于聯(lián)合NAC(10 mmol/L)預(yù)處理細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度（13.63±1.25，14.63±1.60( P<0.05)）；
　　3. Rh123探針標(biāo)記FCM分析細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位結(jié)果表明，CAS(2.0和4.0μg/mL)處理48小時(shí)的人卵巢癌HO-8910細(xì)胞Rh123平均熒光強(qiáng)度分別為12.73±1.25、18.20±1.49，

5、明顯低于NAC(10 mmol/L)預(yù)處理組平均熒光強(qiáng)度（56.20±2.73，59.7±1.79），及溶媒對(duì)照組（0.2%DMSO，84.67±3.73）（P<0.01）；
　　4. Western blot分析結(jié)果顯示經(jīng)CAS(2.0和4.0μg/mL)處理48小時(shí)的人卵巢癌HO-8910細(xì)胞后Cyt C、Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，平均相對(duì)灰度值分別為1.604±0.327，1.781±0.21（P<0.05）與1.311±0.32

6、5、1.665±0.030（P<0.05），相比溶媒對(duì)照組（1.258±0.456，1.047±0.356）有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；而Bcl-2蛋白表達(dá)降低，平均相對(duì)灰度值為1.361±0.024，1.302±0.010（P<0.05），溶媒對(duì)照組為1.674±0.217。
　　結(jié)論：
　　1. CAS能夠誘導(dǎo)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞凋亡；
　　2. CAS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能與促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)ROS生成，激活